黄连粉的薄层色谱鉴别实验报告14篇

黄连粉的薄层色谱鉴别实验报告14篇黄连粉的薄层色谱鉴别实验报告　　表黄连和香连丸中盐酸小檗碱含量测定结果幻表黄连和香连丸中盐酸小檗碱加样回收率试验结果讨论本试验曾分别采用乙醇和盐酸一甲醇溶液对样品进下面是小编为大家整理的黄连粉的薄层色谱鉴别实验报告14篇,供大家参考。

篇一：黄连粉的薄层色谱鉴别实验报告

　　表黄连和香连丸中盐酸小檗碱含量测定结果幻表黄连和香连丸中盐酸小檗碱加样回收率试验结果讨论本试验曾分别采用乙醇和盐酸一甲醇溶液对样品进行提取结果发现采用乙醇提取时小檗碱提取率不佳在本试验薄层展开条件下难以达到理想的分离效果而采用盐酸一甲醇溶液提取时黄连及香连丸中小檗碱与盐酸反应形成生物碱盐使其溶解度增加提取较为完全且在本试验薄层展开条件下能较好的分离故选用盐酸一甲醇溶液作为提取溶剂

　　关于薄层色谱-荧光分光光度法测定黄连及香连丸中盐酸小檗碱的含量

　　【摘要】目的建立黄连和香连丸中盐酸小檗碱的含量测定方法。方法样品经提取、薄层展开后，采用薄层色谱-荧光分光光度法对黄连和香连丸中盐酸小檗碱进行含量测定，展开剂为苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-氨水(6∶3∶1.5∶1.5∶0.5)，激发波长Ex＝365nm，发射波长Em＝409nm。结果盐酸小檗碱在0.473～3.784μg范围内线性关系良好，r＝0.9993。黄连的回收率为99.03%，RSD＝1.86%。香连丸的回收率为97.10%，RSD＝1.09%。结论该法操作简便，分离效果好，灵敏度高。

　　【关键词】黄连；香连丸；荧光分光光度法；盐酸小檗碱；含量测定

　　Keywords：CoptischinensisFranch.；XianglianPills；fluorescencespectrophotometry；berberinehydrochloride；contentdetermination

　　黄连为毛茛科植物黄连(CoptischinensisFranch.)、三角叶黄连(CoptisdeltoidesC.Y.ChengetHsiao)或云连(CoptisteetaWall.)的干燥根茎，具有清热燥湿、抗菌消炎、利胆等功效，临床上用于治疗消化道感染、泻痢等疾病。以黄连作原料的中成药香连丸气微、味苦，具有清热燥湿、行气止痛等功效，临床多用于湿热痢疾、里急后重、腹痛泄泻、菌痢、肠炎等症。盐酸小檗碱为两者共有的有效成分，具有抗菌、抗病毒、抗凝等作用，治疗原发性高血压、糖尿病等疾病。本试验采用薄层色谱-荧光分光光度法测定黄连和香连丸中盐酸小檗碱的含量，为其质量控制提供依据。

　　1仪器与试药

　　RF-5000荧光分光光度计(日本岛津)，UV-1型三用紫外分析仪(上海顾村电光仪器厂)，AG135(四川时运成套仪器有限公司)，80-2离心沉淀器(上海手术器械厂)，CQ-250超声波清洗机(昆山市超声仪器有限公司)。

　　盐酸小檗碱对照品(中国药品生物制品检定所，批号0713-9906)；黄连(贵州，批号20060424；四川，批号20060827、20070422)。药材经本校资源鉴定教研室姚振生教授鉴定为黄连CoptischinensisFranch.；香连丸(湖北诺得胜制药有限公司，批号061001、070101；湖北瑞华制药有限责任公司，批号060117)。硅胶G(青岛海洋化工有限公司，批号050428)；其他试剂均为分析纯。

　　2方法与结果

　　2.1对照品溶液和供试品溶液的制备

　　精密称定干燥至恒重的盐酸小檗碱对照品4.73mg，置于10mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得浓度为0.473mg/mL的对照品溶液。

　　取黄连药材粗粉约0.1g，精密称定，置100mL容量瓶中，加盐酸-甲醇(1∶100)溶液约95mL，60℃水浴加热15min，取出，超声处理30min，室温放置过夜，加甲醇至刻度，滤过，滤液作为黄连供试品溶液[1]。

　　精密称取香连丸约0.4g，加适量盐酸-甲醇(1∶100)溶液，索式回流提取至无色，提取液置水浴上蒸至约20mL，定量转移至50mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为香连丸供试品溶液[2]。

　　2.2薄层分析条件[3]

　　用0.3%CMC-Na为粘合剂自制硅胶G板，取对照品溶液适量，点样后用氨水饱和30min，以苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-氨水(6∶3∶1.5∶1.5∶0.5)为展开剂，展距10cm，晾干后置紫外光(365nm)下检视，盐酸小檗碱呈黄绿色荧光斑点(Rf＝0.40)。

　　2.3荧光条件的确定

　　取对照品溶液，用荧光分光光度计扫描，结果显示，盐酸小檗碱最大激发波长Ex＝365nm，最大发射波长Em＝409nm。

　　取对照品溶液1mL，分别加入不同体积的1mol/LNaOH溶液，并用甲醇定容至2mL，在Ex＝365nm、Em＝409nm处测定其荧光强度。结果表明，随着NaOH量的增加，其荧光强度不断增大，当加入50μL时荧光强度最大，此后继续增加NaOH用量时其荧光强度变化不大。故试验中确定NaOH加入量为50μL。

　　2.4线性关系考察

　　分别吸取对照品溶液1.0、2.0、4.0、5.0、6.0、8.0μL，间隔1.5cm依次点于同一硅胶G板上，按“2.2”项下条件展开，将相应斑点刮入离心管中，同行空白。各斑点用甲醇洗脱并将洗脱液依次转移至2mL容量瓶中，加入1mol/LNaOH溶液50μL，甲醇定容，摇匀，在Ex＝365nm、Em＝409nm处测定荧光强度，以荧光强度为纵坐标，盐酸小檗碱含量为横坐标，得回归方程为：Y＝10.337X－1.897，r＝0.9993，表明盐酸小檗碱在0.473～3.784μg范围内荧光强度与其含量线性关系良好。

　　2.5精密度试验

　　2.5.1同板精密度

　　精密吸取对照品溶液10μL，点于同一硅胶G板上，呈等距离的6个点，按“2.4”项下方法测定，结果RSD＝1.34%。

　　2.5.2异板精密度

　　精密吸取对照品溶液10μL，点于6个不同的硅胶G板上，按“2.4”项下方法测定，结果RSD＝2.55%。

　　2.6稳定性试验

　　取同一份对照品洗脱液，每隔20min测定一次荧光强度，连续测定7次，结果RSD＝1.50%，表明盐酸小檗碱在该条件下2h内稳定性良好。

　　2.7重复性试验

　　取黄连(批号20060827)和香连丸(批号061001)各5份，按“2.1”项下方法提取，并按“2.4”项下方法测定，结果黄连中盐酸小檗碱平均含量为8.04%，RSD＝1.49%；香连丸中盐酸小檗碱平均含量为3.47%，RSD＝2.39%。表明本法重复性良好。

　　2.8样品含量测定

　　精密吸取对照品溶液及黄连、香连丸提取液各10、20、10μL，分别点于同一硅胶板上，按“2.2”项下条件展开，将相应斑点刮入离心管中，加入甲醇1.5mL，振摇5min，超声15min，3000r/min离心10min，取上清液，置2mL容量瓶中，加入1mol/LNaOH溶液50μL，甲醇定容，摇匀，测定其荧光强度，平行测定3次。结果见表1。表1黄连和香连丸中盐酸小檗碱含量测定结果(略)

　　2.9加样回收率试验

　　精密称取已知含量的黄连约0.1g(批号20060827)及香连丸约0.4g(批号061001)，各6份，分别加入适量的盐酸小檗碱对照品溶液，按“2.1”及“2.4”项下方法操作，测定其含量，计算回收率，结果见表2。表2黄连和香连丸中盐酸小檗碱加样回收率试验结果(略)

　　3讨论

　　本试验曾分别采用乙醇和盐酸-甲醇(1∶100)溶液对样品进行提取，结果发现，采用乙醇提取时，小檗碱提取率不佳，在本试验薄层展开条件下，难以达到理想的分离效果；而采用盐酸-甲醇(1∶100)溶液提取时，黄连及香连丸中小檗碱与盐酸反应形成生物碱盐，使其溶解度增加，提取较为完全，且在本试验薄层展开条件下能较好的分离，故选用盐酸-甲醇(1∶100)溶液作为提取溶剂。

　　目前，盐酸小檗碱的含量测定方法有薄层色谱法、紫外分光光度法、高效液相色谱法等[4-5]，由于本试验样品成分复杂，干扰较大，采用薄层色谱法、紫外分光光度法进行含量测定往往背景干扰大，重现性差；而高效液相色谱法易造成色谱

　　柱的钝化。荧光分光光度法具有灵敏性高、选择性强、试验样品量少、设备简单的特点，适用于痕量成分的检测。本试验采取薄层色谱-荧光分光光度法，可以减少盐酸小檗碱衍生物等成分的干扰，简便、有效、回收率高，适用于黄连和香连丸的质量控制。

　　【参考文献】1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社，2005.213.

　　[2]周华平，宋广聪，王仁英.薄层扫描法测定香连丸中盐酸小檗碱的含量[J].基层中药杂志，2000，14(5)：15－16.

　　[3]杨广德，杨二库，王嗣岑.薄层色谱-荧光分光光度法测定黄连中小檗碱的含量[J].西北药学杂志，2000，15(4)：159.

　　[4]梁生旺.中药制剂分析[M].北京：中国中医药出版社，2004.115－118.

　　[5]桑媛，张冬海.黄柏胶囊中小檗碱含量的分光光度分析[J].中国药业，2006，15(5)：50.

篇二：黄连粉的薄层色谱鉴别实验报告

　　黄莲鉴定实验报告

　　篇一：实验黄连中小檗碱的提取、精制和鉴定实验四黄连中小檗碱的提取、精制和鉴定一、概述黄连系毛茛科黄连属植物黄连（coptischinensis

　　Eranch.）的干燥根茎。黄连具有清热燥湿、清心除烦，泻火解毒的功效。黄连的有效成分主要是生物碱，已分离出的主要生物碱有小檗碱（berberine）、掌叶防己碱（palmatine）、黄连碱（jatrorrhizine）等。小檗碱有很强的抗菌作用，已广泛地应用于临床。

　　主要化学成分的结构及理化性质：小檗碱为黄色针状结晶，mp为154℃，游离的小檗碱能缓缓溶于水（1：20）及乙醇中（1：100），易溶于热水及热醇，难溶于乙醚，石油醚、苯、三氯甲烷等有机溶剂，其盐在水中溶解度很小，尤其是盐酸盐。盐酸盐为l：500，枸橼酸盐1：125，酸性硫酸盐1：100，硫酸盐l：30，但在热水中都比较容易溶解。小檗碱常以季铵碱形式存在，碱性强（pka11.53），能溶于水中，其水溶液有三种互变形式。

　　NHCHOOCH333OCH3

　　季铵式（红棕色）醇式（黄色）醛式（黄色）N+OCH3OCH3小檗碱（黄连素）二、实验部分（一）实验目的1、掌握小檗碱的结构特点和理化性质，以及一般的提取精制方法。2、掌握旋转蒸发仪的使用。3、熟悉盐酸小檗碱的色谱鉴定和定性鉴定方法。（二）实验原理1、提取原理：小檗碱为异喹啉类小檗碱，结构中的氮原子以季铵盐形式存在，显一定程度的亲水性，因此游离小檗碱能溶与水(1:20)及乙醇(1:100)，热水或热乙醇中易溶，不溶于乙醚、氯仿、苯等有机溶剂。盐酸小檗碱在沸水中溶解，在冷水中析出。2、分离原理：小檗碱与酸所成的盐在水中的溶解度不尽相同，如硫酸小檗碱为(1:30)，酸性硫酸小檗碱为(1:100)，枸橼酸小檗碱为(1:125)，而盐酸小檗碱为(1:500)。本实验就是据游离小檗碱在水和乙醇中的溶解度较大，而其盐酸盐难溶于水的性质进行提取和精制的。

　　（三）实验药材、仪器与试剂1、药材：黄连50g（每组）。2、仪器：回流装置、水浴锅、冰箱、旋转蒸发仪、烧杯（250ml）、抽滤装置、滤纸、层析缸、滤纸、试管、电炉。3、试剂：75%乙醇、95%乙醇、蒸馏水、10%盐酸、氯化钠、乙醇、氯仿-甲醇-1/10盐酸（1:1:1）、10%硫酸、漂白粉、10%氢氧化钠、丙酮。（四）实验内容1、小檗碱的提取取黄连粗粉50g，加入400ml75%的乙醇回流1.5h，四层纱布过滤，药渣用95%乙醇300ml回流1h，四层纱布过滤，并用少量蒸馏水洗涤药渣，合并两次滤液和洗液，放于冰箱中。2、小檗碱的浓缩用旋转蒸发仪将小檗碱提取液浓缩至糖浆状（小于50ml，无醇味）。3、盐酸小檗碱的制备将浓缩液倒入100ml沸水中（换成250ml烧杯）煮沸至溶解（10min），趁热抽滤，在滤液中加10%盐酸，调制pH=2，加入氯化钠10g，放入冰箱析晶。4、盐酸小檗碱的精制（1）抽滤，得到盐酸小檗碱粗品。

　　（2）取粗品放入100ml沸水中，搅拌溶解，继续加热10min，趁热抽滤，滤液放置过夜。（滤取结晶，先用少量1%盐酸洗一次，再用少量蒸馏水洗数次，抽干，干燥后得到小檗碱精品。）

　　5、鉴定（1）化学检识①取盐酸小檗碱少许，加10%的H2SO42ml，溶解后加漂白粉少许，即显樱红色。②取盐酸小檗碱约50mg，加蒸馏水5ml，水浴加热，溶解后加10%氢氧化纳试液2滴，显橙色。溶液放冷过滤，取澄清滤液，加丙酮4滴，即发生浑浊。放置后，生成黄色的丙酮小檗碱沉淀。（2）纸层析鉴定样品：1%醇溶液。（每组0.1g溶于10ml乙醇）标准品：1%盐酸小檗碱醇溶液展开剂：氯仿—甲醇—1/10MHCL(1:1:1下行)显色：自然光下观察（五）实验注意事项1、提取时两次乙醇浓度不等，提醒学生不要加错。2、漂白粉加少许即可，否则影响结果3、纸条要保持平整，不靠壁。

　　（六）思考题1、小檗碱为哪类生物碱，可以用什么方法提取？2、回流与蒸馏的区别是什么？3、小檗碱精制的原理是什么？4、旋转蒸发仪使用时需注意哪些问题？篇二：实验三黄连中盐酸小檗碱的提取分离与鉴定实验三黄连中盐酸小檗碱的提取分离与鉴定小檗碱又称黄连素，是在高等植物中分布比较广泛的、有明显生理活性的化学成分。主要存在于黄连、黄柏、三颗针等中草药中。小檗碱具有显著的抗微生物、抗原虫的作用，临床用其盐酸盐（即盐酸黄连素）治疗细菌性感染如痢疾、急性肠胃炎、呼吸道感染等症。黄连为毛茛科黄连属植物黄连（CoptischinensisFranch。），三角叶黄连（C。deltoideaC。Y。ChengetHsiao）或云连（C。teetoidesC。Y。Cheng）的根茎，含有小檗碱(1)、巴马汀(2)、黄连碱(3)、甲基黄连碱(4)、药根碱(5)等生物碱，其中以小檗碱含量最高，可达10%左右，小檗碱以盐酸盐的形式存在于黄连中。目前制药工业提取小檗碱主要以三颗针为原料。三颗针来源于小檗科小檗属（Berberis）多种植物，其根皮含生物碱约2%，主要含小檗碱、小檗胺、药根碱、巴马汀等生物碱。R1R2R3R4R5

　　1R1OR2OR5￡-OR3OR4+3CH3HCH2CH3CH3CH3CH3HCH2CH2CH2CH23HCH3CH3CH3H2345

　　小檗碱(Berberine)属异喹啉类生物碱，自水和乙醇中结晶出来的小檗碱为黄色长针状结晶，含5个结晶水，在100℃干燥时即失去结晶水，转为棕黄色，加热至110℃时，其颜色加深变暗色。Mp.145℃至160℃即分解。

　　OCH3H3NHOCH3OH小檗胺H3COH

篇三：黄连粉的薄层色谱鉴别实验报告

　　专业班级学号实验课程名称开课实验室

　　实验报告

　　姓名同组人

　　实验项目名称实验时间

　　评分指导老师

　　一、实验目的

　　掌握薄层色谱的基本原理及其在有机物分离中的应用。

　　二、实验原理

　　有机混合物中各组分对吸附剂的吸附能力不同，当展开剂流经吸附剂时，有机物各组分会发生无数次吸附和解吸过程，吸附力弱的组分随流动相迅速向前，而吸附力弱的组分则滞后，由于各组分不同的移动速度而使得她们得以分离。物质被分离后在图谱上的位置，常用比移值Rf表示。

　　原点至层析斑点中心的距离

　　R

　　f

　　原点至溶剂前沿的距离

　　三、实验仪器与药品

　　5.0cm×15.0cm硅胶层析板两块，卧式层析槽一个，点样用毛细管。

　　四、物理常数

　　名称分子量

　　甲基橙327.33

　　熔点/℃300

　　沸点/℃

　　未确定

　　折光率/n20

　　1.6266

　　荧光黄332.31

　　未确定未确定未确定

　　比重1.203

　　2

　　-——

　　颜色和形态

　　橙红色鳞状晶体或

　　粉末

　　橙红色结晶粉末

　　溶解度

　　微溶于水，较易溶于热水，不溶于乙醇不溶于水，乙醚，氯仿和苯，溶于碱液。

　　1/4

　　五、仪器装置图“浸有层析板的层析槽”图

　　1-层析缸，2-薄层板，3-展开剂饱和蒸汽，4-层析液

　　六、实验步骤

　　（1）薄层板的制备：称取2～5g层析用硅胶，加适量水调成糊状，等石膏开始固化时，再加少许水，调

　　成匀浆，平均摊在两块5.0×15cm的层析玻璃板上，再轻敲使其涂布均匀。（老师代做！）固化后，经105℃烘烤活化0.5h，贮于干燥器内备用。

　　（2）点样。在层析板下端2.0cm处，（用铅笔轻化一起始线，并在点样出用铅笔作一记号为原

　　点。）取毛细管，分别蘸取偶氮苯、偶氮苯与苏丹红混合液，点于原点上（注意点样用的毛细管不能混用，毛细管不能将薄层板表面弄破，样品斑点直径在1~2mm为宜！斑点间距为1cm）（3）定位及定性分析

　　用铅笔将各斑点框出，并找出斑点中心，用小尺量出各斑点到原点的距离和溶剂前沿到起始线的距离，然后计算各样品的比移值并定性确定混合物中各物质名称。

　　。。

　　..................溶剂前沿

　　。

　　②

　　①

　　③

　　。。

　　纯混

　　纯染料

　　甲基橙荧光黄斑点移动距离a

　　（cm）溶剂移动距离b

　　（cm）

　　Rf

　　混合染料2

　　甲基橙荧光黄

　　混合液

　　实验注意事项1、铺板时一定要铺匀，特别是边、角部分，晾干时要放在平整的地方。

　　2、点样时点要细，直径不要大于2mm,间隔0.5cm以上，浓度不可过大，以免出现拖尾、混杂现象。

　　3、展开用的烧杯要洗净烘干，放入板之前，要先加展开剂，盖上表面皿，让烧杯内形成一定的蒸气压。点样的一端要浸入展开剂0.5cm以上,但展开剂不可没过样品原点。当展开剂上升到距上端0.5－1cm时要及时将板取出，用铅笔标示出展开剂前沿的位置。

　　讨论：

　　七、思考题

　　温馨提示：最好仔细阅读后才下载使用，万分感谢！

篇四：黄连粉的薄层色谱鉴别实验报告

　　薄层色谱法实验报告

　　文档编制序号：[KK8UY-LL9IO69-TTO6M3-MTOL89-FTT688]

　　专业班级学号实验课程名称开课实验室

　　实验报告

　　姓名

　　评分

　　同组人

　　指导老师

　　实验项目名称

　　实验时间

　　一、实验目的

　　掌握薄层色谱的基本原理及其在有机物分离中的应用。

　　二、实验原理

　　有机混合物中各组分对吸附剂的吸附能力不同，当展开剂流经吸附剂时，有

　　机物各组分会发生无数次吸附和解吸过程，吸附力弱的组分随流动相迅速向前，

　　而吸附力弱的组分则滞后，由于各组分不同的移动速度而使得她们得以分离。物

　　质被分离后在图谱上的位置，常用比移值Rf表示。

　　三、实验仪器与药品

　　×硅胶层析板两块，卧式层析槽一个，点样用毛细管。

　　四、物理常数名称分子量

　　甲基橙

　　熔点/℃300

　　沸点/℃未确定

　　荧光黄

　　未确定未确定

　　折光率/n20

　　未确定

　　比重

　　-——

　　颜色和形态

　　橙红色鳞状晶体或

　　粉末

　　橙红色结晶粉末

　　溶解度

　　微溶于水，较易溶于热水，不溶于乙醇不溶于水，乙醚，氯仿和苯，溶

　　五、仪器装置图

　　于碱液。

　　“浸有层析板的层析槽”图

　　1-层析缸，2-薄层板，3-展开剂饱和蒸汽，4-层析液

　　六、实验步骤

　　（1）薄层板的制备：

　　称取2～5g层析用硅胶，加适量水调成糊状，等石膏开始固化时，再加少许

　　水，调成匀浆，平均摊在两块×15cm的层析玻璃板上，再轻敲使其涂布均匀。

　　（老师代做！）

　　固化后，经105℃烘烤活化，贮于干燥器内备用。

　　（2）点样。

　　在层析板下端处，（用铅笔轻化一起始线，并在点样出用铅笔作一记号为原

　　点。）取毛细管，分别蘸取偶氮苯、偶氮苯与苏丹红混合液，点于原点上（注意

　　点样用的毛细管不能混用，毛细管不能将薄层板表面弄破，样品斑点直径在

　　1~2mm为宜！斑点间距为1cm）

　　（3）定位及定性分析

　　用铅笔将各斑点框出，并找出斑点中心，用小尺量出各斑点到原点的距离和

　　溶剂前沿到起始线的距离，然后计算各样品的比移值并定性确定混合物中各物质

　　名称。

　　纯染料

　　斑点移动距离a（cm）

　　溶剂移动距离b

　　甲基橙荧光黄

　　甲基橙

　　混合染料2

　　荧光黄

　　混合液

　　（cm）Rf

　　实验注意事项1、铺板时一定要铺匀，特别是边、角部分，晾干时要放在平整的地方。2、点样时点要细，直径不要大于2mm,间隔以上，浓度不可过大，以免出现拖尾、混杂现象。3、展开用的烧杯要洗净烘干，放入板之前，要先加展开剂，盖上表面皿，让烧杯内形成一定的蒸气压。点样的一端要浸入展开剂以上,但展开剂不可没过样品原点。当展开剂上升到距上端－1cm时要及时将板取出，用铅笔标示出展开剂前沿的位置。讨论：七、思考题

篇五：黄连粉的薄层色谱鉴别实验报告

　　薄层色谱法实验报告

　　RUSERredactedonthenightofDecember17,2020

　　专业班级学号实验课程名称开课实验室

　　实验报告

　　姓名同组人

　　实验项目名称实验时间

　　评分指导老师

　　一、实验目的

　　掌握薄层色谱的基本原理及其在有机物分离中的应用。

　　二、实验原理

　　有机混合物中各组分对吸附剂的吸附能力不同，当展开剂流经吸附剂时，有机物各组分会发生无数次吸附和解吸过程，吸附力弱的组分随流动相迅速向前，而吸附力弱的组分则滞后，由于各组分不同的移动速度而使得她们得以分离。物质被分离后在图谱上的位置，常用比移值Rf表示。

　　三、实验仪器与药品

　　×硅胶层析板两块，卧式层析槽一个，点样用毛细管。

　　四、物理常数

　　名称分子量熔点/℃沸点/℃

　　甲基橙

　　300未确定

　　折光率/n20

　　荧光黄

　　未确定未确定未确定

　　比重-——

　　颜色和形态

　　橙红色鳞状晶体或

　　粉末

　　橙红色结晶粉末

　　溶解度

　　微溶于水，较易溶于热水，不溶于乙醇不溶于水，乙醚，氯仿和苯，溶于碱液。

　　五、仪器装置图

　　“浸有层析板的层析槽”图

　　1-层析缸，2-薄层板，3-展开剂饱和蒸汽，4-层析液

　　六、实验步骤

　　（1）薄层板的制备：

　　称取2～5g层析用硅胶，加适量水调成糊状，等石膏开始固化时，再加少许水，

　　调成匀浆，平均摊在两块×15cm的层析玻璃板上，再轻敲使其涂布均匀。（老师代

　　做！）

　　固化后，经105℃烘烤活化，贮于干燥器内备用。

　　（2）点样。

　　在层析板下端处，（用铅笔轻化一起始线，并在点样出用铅笔作一记号为原

　　点。）取毛细管，分别蘸取偶氮苯、偶氮苯与苏丹红混合液，点于原点上（注意点样

　　用的毛细管不能混用，毛细管不能将薄层板表面弄破，样品斑点直径在1~2mm为宜！

　　斑点间距为1cm）

　　（3）定位及定性分析

　　用铅笔将各斑点框出，并找出斑点中心，用小尺量出各斑点到原点的距离和溶剂

　　前沿到起始线的距离，然后计算各样品的比移值并定性确定混合物中各物质名称。

　　纯染料

　　混合染料

　　2

　　甲基橙荧光黄甲基橙荧光黄混合液

　　斑点移动距离a

　　（cm）

　　溶剂移动距离b

　　（cm）

　　Rf

　　实验注意事项

　　1、铺板时一定要铺匀，特别是边、角部分，晾干时要放在平整的地

　　方。

　　2、点样时点要细，直径不要大于2mm,间隔以上，浓度不可过大，

　　以免出现拖尾、混杂现象。

　　3、展开用的烧杯要洗净烘干，放入板之前，要先加展开剂，盖上表

　　面皿，让烧杯内形成一定的蒸气压。点样的一端要浸入展开剂以上,

　　但展开剂不可没过样品原点。当展开剂上升到距上端－1cm时要及

　　时将板取出，用铅笔标示出展开剂前沿的位置。

　　讨论：

　　七、思考题

篇六：黄连粉的薄层色谱鉴别实验报告

　　实验报告

　　专业班级

　　姓名

　　评分

　　学号

　　同组人

　　指导老师

　　实验课程名称

　　实验项目名称

　　开课实验室

　　实验时间

　　一、实验目的

　　掌握薄层色谱的基本原理及其在有机物分离中的应用。

　　二、实验原理

　　有机混合物中各组分对吸附剂的吸附能力不同，当展开剂流经吸附剂时，有

　　机物各组分会发生无数次吸附和解吸过程，吸附力弱的组分随流动相迅速向前，

　　而吸附力弱的组分则滞后，由于各组分不同的移动速度而使得她们得以分离。物

　　质被分离后在图谱上的位置，常用比移值Rf表示。三、实验仪器与药品

　　×硅胶层析板两块，卧式层析槽一个，点样用毛细管。

　　四、物理常数

　　名称分子量熔点沸点折光率比重颜色和形溶解度

　　/℃

　　/℃

　　/n20

　　态

　　甲基

　　300未确

　　橙红色微溶于

　　橙

　　定

　　鳞状晶水，较

　　体或粉易溶于

　　末热水，

　　不溶于

　　乙醇

　　荧光

　　未确定未确未确定-—橙红色不溶于

　　黄

　　定

　　—结晶粉水，乙

　　末醚，氯

　　仿和

　　苯，溶

　　于碱

　　液。

　　五、仪器装置图

　　“浸有层析板的层析槽”图

　　1-层析缸，2-薄层板，3-展开剂饱和蒸汽，4-层析液

　　六、实验步骤

　　（1）薄层板的制备：

　　称取2～5g层析用硅胶，加适量水调成糊状，等石膏开始固化时，再加少许

　　水，调成匀浆，平均摊在两块×15cm的层析玻璃板上，再轻敲使其涂布均匀。（老

　　师代做！）

　　固化后，经105℃烘烤活化，贮于干燥器内备用。

　　（2）点样。

　　在层析板下端处，（用铅笔轻化一起始线，并在点样出用铅笔作一记号为原

　　点。）取毛细管，分别蘸取偶氮苯、偶氮苯与苏丹红混合液，点于原点上（注意点

　　样用的毛细管不能混用，毛细管不能将薄层板表面弄破，样品斑点直径在1~2mm

　　为宜！斑点间距为1cm）

　　（3）定位及定性分析

　　用铅笔将各斑点框出，并找出斑点中心，用小尺量出各斑点到原点的距离和

　　溶剂前沿到起始线的距离，然后计算各样品的比移值并定性确定混合物中各物质

　　名称。

　　纯染料

　　混合染料

　　2

　　甲基橙荧光黄甲基橙

　　荧光黄混合液

　　斑点移动距离a

　　（cm）

　　溶剂移动距离b

　　（cm）

　　Rf

　　实验注意事项

　　1、铺板时一定要铺匀，特别是边、角部分，晾干时要放在平整的地方。

　　2、点样时点要细，直径不要大于2mm,间隔以上，浓度不可过大，以免出现拖尾、

　　混杂现象。

　　3、展开用的烧杯要洗净烘干，放入板之前，要先加展开剂，盖上表面皿，让烧杯

　　内形成一定的蒸气压。点样的一端要浸入展开剂以上,但展开剂不可没过样品原

　　点。当展开剂上升到距上端－1cm时要及时将板取出，用铅笔标示出展开剂前沿

　　的位置。

　　讨论：

　　七、思考题

篇七：黄连粉的薄层色谱鉴别实验报告

　　取毛细管分别蘸取偶氮苯偶氮苯与苏丹红混合液点于原点上注意点样用的毛细管不能混用毛细管不能将薄层板表面弄破样品斑点直径在12mm点间距为1cm3定位及定性分析用铅笔将各斑点框出并找出斑点中心用小尺量出各斑点到原点的距离和溶剂前沿到起始线的距离然后计算各样品的比移值并定性确定混合物中各物质名称

　　专业班级学号实验课程名称开课实验室

　　实验报告

　　姓名

　　评分

　　同组人

　　指导老师

　　实验项目名称

　　实验时间

　　一、实验目的

　　掌握薄层色谱的基本原理及其在有机物分离中的应用。

　　二、实验原理

　　有机混合物中各组分对吸附剂的吸附能力不同，当展开剂流经吸附剂时，有机物各组分会发生无数次吸附和解吸过程，吸附力弱的组分随流动相迅速向前，而吸附力弱的组分则滞后，由于各组分不同的移动速度而使得她们得以分离。物质被分离后在图谱上的位置，常用比移值Rf表示。

　　三、实验仪器与药品

　　5.0cm×15.0cm硅胶层析板两块，卧式层析槽一个，点样用毛细管。

　　四、物理常数

　　名称分子量

　　甲基橙327.33

　　熔点/℃300

　　沸点/℃

　　未确定

　　折光率/n20

　　1.6266

　　荧光黄332.31

　　未确定未确定未确定

　　比重1.203

　　2

　　-——

　　颜色和形态

　　橙红色鳞状晶体或

　　粉末

　　橙红色结晶粉末

　　溶解度

　　微溶于水，较易溶于热水，不溶于乙醇不溶于水，乙醚，氯仿和苯，溶于碱液。

　　五、仪器装置图

　　“浸有层析板的层析槽”图

　　1-层析缸，2-薄层板，3-展开剂饱和蒸汽，4-层析液

　　六、实验步骤

　　（1）薄层板的制备：称取2～5g层析用硅胶，加适量水调成糊状，等石膏开始固化时，再加少许水，调成匀浆，

　　平均摊在两块5.0×15cm的层析玻璃板上，再轻敲使其涂布均匀。（老师代做！）固化后，经105℃烘烤活化0.5h，贮于干燥器内备用。

　　（2）点样。在层析板下端2.0cm处，（用铅笔轻化一起始线，并在点样出用铅笔作一记号为原点。）取毛

　　细管，分别蘸取偶氮苯、偶氮苯与苏丹红混合液，点于原点上（注意点样用的毛细管不能混用，毛细管不能将薄层板表面弄破，样品斑点直径在1~2mm为宜！斑点间距为1cm）（3）定位及定性分析

　　用铅笔将各斑点框出，并找出斑点中心，用小尺量出各斑点到原点的距离和溶剂前沿到起始线的距离，然后计算各样品的比移值并定性确定混合物中各物质名称。

　　纯染料

　　混合染料

　　2

　　甲基橙荧光黄甲基橙荧光黄混合液

　　斑点移动距离a

　　（cm）

　　溶剂移动距离b

　　（cm）

　　Rf

　　实验注意事项1、铺板时一定要铺匀，特别是边、角部分，晾干时要放在平整的地方。2、点样时点要细，直径不要大于2mm,间隔0.5cm以上，浓度不可过大，以免出现拖尾、混杂现象。3、展开用的烧杯要洗净烘干，放入板之前，要先加展开剂，盖上表面皿，让烧杯内形成一定的蒸气压。点样的一端要浸入展开剂0.5cm以上,但展开剂不可没过样品原点。当展开剂上升到距上端0.5－1cm时要及时将板取出，用铅笔标示出展开剂前沿的位置。讨论：

　　七、思考题

篇八：黄连粉的薄层色谱鉴别实验报告

　　专业班级学号实验课程名称开课实验室

　　实验报告

　　姓名

　　评分

　　同组人

　　指导老师

　　实验项目名称

　　实验时间

　　一、实验目的

　　掌握薄层色谱的基本原理及其在有机物分离中的应用。

　　二、实验原理

　　有机混合物中各组分对吸附剂的吸附能力不同，当展开剂流经吸附剂时，有机物各

　　组分会发生无数次吸附和解吸过程，吸附力弱的组分随流动相迅速向前，而吸附力弱的

　　组分则滞后，由于各组分不同的移动速度而使得她们得以分离。物质被分离后在图谱上

　　的位置，常用比移值Rf表示。

　　原点至层析斑点中心的距离

　　R

　　f

　　原点至溶剂前沿的距离

　　三、实验仪器与药品

　　5.0cm×15.0cm硅胶层析板两块，卧式层析槽一个，点样用毛细管。

　　四、物理常数

　　名称分子量熔点/℃沸点/℃折光率比重颜色和形溶解度

　　/n20

　　态

　　甲基橙327.33

　　300未确

　　1.6266

　　1.203橙红色鳞微溶于

　　定

　　2状晶体或水，较易

　　精品

　　荧光黄332.31未确定未确定未确定

　　五、仪器装置图“浸有层析板的层析槽”图

　　粉末溶于热水，不溶于乙醇

　　-——橙红色结不溶于晶粉末水，乙醚，氯仿和苯，溶于碱液。

　　1-层析缸，2-薄层板，3-展开剂饱和蒸汽，4-层析液六、实验步骤

　　（1）薄层板的制备：称取2～5g层析用硅胶，加适量水调成糊状，等石膏开始固化时，再加少许水，调

　　成匀浆，平均摊在两块5.0×15cm的层析玻璃板上，再轻敲使其涂布均匀。（老师代做！）固化后，经105℃烘烤活化0.5h，贮于干燥器内备用。

　　精品

　　（2）点样。在层析板下端2.0cm处，（用铅笔轻化一起始线，并在点样出用铅笔作一记号为原

　　点。）取毛细管，分别蘸取偶氮苯、偶氮苯与苏丹红混合液，点于原点上（注意点样用的毛细管不能混用，毛细管不能将薄层板表面弄破，样品斑点直径在1~2mm为宜！斑点间距为1cm）（3）定位及定性分析

　　用铅笔将各斑点框出，并找出斑点中心，用小尺量出各斑点到原点的距离和溶剂前沿到起始线的距离，然后计算各样品的比移值并定性确定混合物中各物质名称。

　　。。

　　..................溶剂前沿

　　。

　　②

　　①

　　③

　　。。

　　纯混

　　纯染料

　　甲基橙荧光黄斑点移动距离a

　　（cm）溶剂移动距离b

　　（cm）

　　Rf

　　混合染料2

　　甲基橙荧光黄

　　混合液

　　精品

　　实验注意事项1、铺板时一定要铺匀，特别是边、角部分，晾干时要放在平整的地方。2、点样时点要细，直径不要大于2mm,间隔0.5cm以上，浓度不可过大，以免出现拖尾、混杂现象。3、展开用的烧杯要洗净烘干，放入板之前，要先加展开剂，盖上表面皿，让烧杯内形成一定的蒸气压。点样的一端要浸入展开剂0.5cm以上,但展开剂不可没过样品原点。当展开剂上升到距上端0.5－1cm时要及时将板取出，用铅笔标示出展开剂前沿的位置。讨论：七、思考题

　　精品

篇九：黄连粉的薄层色谱鉴别实验报告

　　薄层色谱法实验报告

　　专业班级学号实验课程名称开课实验室

　　实验报告

　　姓名同组人

　　实验项目名称实验时间

　　评分指导老师

　　一、实验目的

　　掌握薄层色谱的基来源理及其在有机物分别中的应用。

　　二、实验原理

　　有机混淆物中各组分对吸附剂的吸附能力不一样，当睁开剂流经吸附剂时，有机物各组分会发生无数次吸附和解吸过程，吸附力衰的组分随流动相快速向前，而吸附力衰的组分则滞后，因为各组分不一样的挪动速度而使得她们得以分别。物质被分别后在图谱上的地点，常用比移值Rf表示。

　　三、实验仪器与药品

　　5.0cm×15.0cm硅胶层析板两块，卧式层析槽一个，点样用毛细管。

　　四、物理常数

　　名称分子量熔点/℃沸点/℃

　　甲基橙3

　　300

　　未确

　　定

　　折光率/n20

　　荧光黄1

　　未确立未确立未确立

　　比重2

　　-——

　　颜色和形态

　　橙红色鳞状晶体或

　　粉末

　　橙红色结晶粉末

　　溶解度

　　微溶于水，较易溶于热水，不溶于乙醇不溶于水，乙醚，氯仿和苯，溶于碱液。

　　五、仪器装置图

　　“浸有层析板的层析槽”图

　　1-层析缸，2-薄层板，3-睁开剂饱和蒸汽，4-层析液

　　六、实验步骤

　　薄层色谱法实验报告

　　（1）薄层板的制备：称取2～5g层析用硅胶，加适当水调成糊状，等石膏开始固化时，再加少量水，调

　　成匀浆，均匀派在两块5.0×15cm的层析玻璃板上，再轻敲使其涂布均匀。（老师代做！）固化后，经105℃烘烤活化0.5h，贮于干燥器内备用。

　　（2）点样。在层析板下端2.0cm处，（用铅笔轻化一同始线，并在点样出用铅笔作一记号为原

　　点。）取毛细管，分别蘸取偶氮苯、偶氮苯与苏丹红混淆液，点于原点上（注意点样用的毛细管不可以混用，毛细管不可以将薄层板表面弄破，样品斑点直径在1~2mm为宜！斑点间距为1cm）（3）定位及定性剖析

　　用铅笔将各斑点框出，并找出斑点中心，用小尺量出各斑点到原点的距离和溶剂前沿到开端线的距离，而后计算各种品的比移值并定性确立混淆物中各物质名称。

　　纯染料

　　混淆染料

　　2

　　甲基橙荧光黄斑点挪动距离a

　　甲基橙

　　荧光黄混淆液

　　（cm）溶剂挪动距离b

　　（cm）

　　Rf

　　实验注意事项1、铺板时必定要铺匀，特别是边、角部分，晾干时要放在平坦的地

　　方。

　　2、点样时点要细，直径不要大于2mm,间隔0.5cm以上，浓度不行过

　　大，免得出现拖尾、混淆现象。

　　3、睁开用的烧杯要洗净烘干，放入板以前，要先加睁开剂，盖上表面皿，让烧杯内形成必定的蒸气压。点样的一端要浸入睁开剂

　　以上,但睁开剂不行没过样品原点。当睁开剂上涨到距上端0.5－1cm

　　薄层色谱法实验报告

　　时要实时将板拿出，用铅笔标示出睁开剂前沿的地点。议论：七、思虑题

篇十：黄连粉的薄层色谱鉴别实验报告

　　有机化学实验薄层色谱实验报告

　　【实验目的】学习薄层层析的基本原理和分离鉴别有机化合物的操作方法。【实验重点和难点】学习薄层色谱法的原理及方法。【实验类型】基础性【实验学时】4学时【实验装置和药品】主要实验仪器：4块显微载玻片50mL烧杯分液漏斗布氏漏斗研钵烘箱吸管玻璃板点样毛细管、大头针、直尺、玻棒无水硫酸钠主要化学试剂：95%乙醇石油醚（60-900C）丙酮乙酸乙酯菠菜叶0.5%羧甲基纡维素钠(CMC)水溶液硅胶G【实验装置图】

　　【实验原理】

　　薄层色谱（thinlayerchromatography，缩写TLC）

　　薄层色谱又叫薄板层析，是快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实验技术，属固-液吸附色谱，它兼备了柱色谱和纸色谱的优点，一方面适用于少量样品（几到几微克，甚至0.01微克）的分离；另一方面在制作薄层板时，把吸附层加厚加大，又可用来精制样品，此法特别适用于挥发性较小或较高温度易发生变化而不能用气相色谱分析的物质。此外，薄层色谱法还可用来跟踪有机反应及进行柱色谱之前的一种“预试”。

　　薄层层析法是一种微量快速的分析分离方法。它具有灵敏、快速准确等优点。

　　薄层层析的原理和柱层析一样，属于固一液吸附层析的类型。通常是把吸附剂放在玻璃板上成为一个薄层，是为固定相，以有机溶剂作为流动相。实验时，把要分离的混合物滴在薄层析的一端，用适当的溶剂展开，当溶剂流经吸附剂时，由于各物质被吸附的强弱不同，就以不同的速率随着溶剂移动。展开一定时间后，让溶剂停止流动，混合物中各组分就停留在薄层析上显示出一个个色斑的色谱图。若各组分无色，可喷洒一定的显色剂使之显色。

　　它是利用混合物中各组分在某一物质中的吸附或溶解性能（即分配）的不同，或其它亲和作用性能的差异，使混合物的溶液流经该种物质，进行反复的吸附或分配等作用，从而将各组分分开。

　　它是近年来发展起来的一种微量快速而简单的色谱法，它兼备了柱色谱和纸色谱的优点。

　　最典型的薄层色谱法是在一块洗净干燥的玻璃片上均匀铺上一薄层吸附剂，

　　制成薄层板。用毛细管将样品溶液点在起点处，把此薄层板置于盛有溶剂的容器中，待溶液到达前沿后取出，晾干，显色，测定色斑的位置。由于层析是在薄层

　　板上进行，故称为薄层层析。

　　记录原点至主斑点中心及展开剂前沿的距离，计算此移值（Rf）：Rf=溶质的最高浓度中心至原点中心的距离/溶剂前沿至原点中心的距离混合物中各物质在薄析上随溶剂移动的相对距离称为比移值（Rf值）。

　　在一定条件下，各物质具有一定的Rf值。不同物质在相同条件下，具有不同的Rf值。因此，可利用Rf值对物质进行定性鉴定。但物质的Rf值常因吸附剂的种类和活性，薄层的厚度，展开剂及温度等的不同而异。所以在鉴定的样品时，常用已知成分作对照试验，在同一个薄层板上进行层析，然后通过Rf值的比较，对物质作定性鉴定。根据斑点的面积大小和颜色的深浅的标准物的对照下还可进行定量。

　　【实验內容及步骤】

　　（一）菠菜色素的提取

　　称取20g洗净后，用滤纸吸干的新鲜的菠菜叶，用剪刀剪碎并与20mL乙醇拌匀，在研钵中研磨约5min，然后用布氏漏斗抽滤菠菜叶，弃去滤液。将菠菜汁放回研钵，每次用20mL3:2的石油醚—乙醇混合液萃取2次，每次需加以研磨并且抽滤，合并深绿色萃取液，转入分液漏斗，每次用10mL水洗涤两次，弃去水—乙醇层，石油醚层用无水硫酸钠干燥水后，滤入圆底烧瓶，在水浴上蒸去大部分石油醚至体积约为1mL为止。

　　（二）薄层板的制备

　　取7.5×2.5cm左右的载玻片5块，洗净晾干。

　　在50mL烧杯中放置3g硅胶G，逐渐加入0.5%羧甲基纡维素钠(CMC)水溶液8mL，调成均匀的糊状，用滴管吸取此糊状物，涂于上述洁净的载玻片上。

　　用手将带浆的玻片在玻璃板或水平的桌面上做上下轻微的颠动，并不时转动方向，制成簿层均匀，表面光洁平整的簿层板。涂好硅胶G的簿层板置于水平的玻璃板上，在室温放置0.5h干燥后后，放入烘箱中，缓慢升温至110℃（目的是活化），恒温0.5h，取出稍冷后置于干燥器中备用。

　　1.点样

　　取2块用上述方法制好的薄层板，分别在距一端1cm处用铅笔轻轻划一横线作为起始线。取管口平整的毛细管扦入样品溶液中，在一块板的起点线上点上述提取液样品。如果样品的颜色较浅，可重复点样，重复点样前必须待前次样品干燥后进行，样点直径不应超过2mm。

　　2.展开

　　展开剂：

　　（a）石油醚---丙酮=8:2（体积比）

　　（b）石油醚---乙酸乙酯=6:4（体积比）

　　待样点干燥后，小心放入巳加入展开剂的250ml广口瓶(或小烧杯)中进行展开。点样板一端应浸入展开剂0.5cm。盖好瓶塞，观察展开剂前沿上升至离板的上端1cm处取出，尽快用铅笔在展开剂上升的前沿处划一记号，在空气中晾干后观察分离的情况，分别用展开剂a和b展开，比较不同展开剂系统的展开效果。

　　3.显色：（本次实验不显示）

　　展开完毕，取出薄层板，划出前沿线。如果化合物本身有顔色，就可直接观察它的斑点；如果本身无色，可先在紫外灯下观察有无荧光斑点，用小针在薄层上划出斑点的位置；也可在溶液蒸发前用显色剂喷雾显色。不同类型的化合物需选用不同的显色剂。凡可用于纸色谱的显色剂都可用于薄层色谱，薄层色谱还可使用腐蚀性的显色剂。如浓硫酸、浓盐酸和浓磷酸等。

　　一．实验注意事项：

　　1.本实验关键在于薄层板的制备要好。要求平滑均匀，即不应有纹路、带团粒，也不应有能看见玻璃的薄涂料点。

　　2.点样用的毛细管必须专用，不得弄混，点样时，使毛细管液面刚好接触到薄层即可。

　　3.点样时注意样点不能过大,切勿点样过重而使薄层破坏。

　　4.展开时注意观察样点的移动情况。

　　5.仔细测量移动的距离，计算Rf值

　　【实验相关內容】

篇十一：黄连粉的薄层色谱鉴别实验报告

P>　　100溶液索式回流提取至无色提取液置水浴上蒸至约20ml定量转移至50ml容量瓶中加甲醇稀释至刻度摇匀作为香连丸供试品溶液怛122薄层分析条件1用03cmcna为粘合剂自制硅胶g板取对照品溶液适量点样后用氨水饱和30min以苯一乙酸乙酯一异丙醇一甲醇一氨水6

　　关于薄层色谱-荧光分光光度法测定黄连及香连丸中盐酸小檗碱的含量

　　【摘要】目的建立黄连和香连丸中盐酸小檗碱的含量测定方法。方法样品经提取、薄层展开后，采用薄层色谱-荧光分光光度法对黄连和香连丸中盐酸小檗碱进行含量测定，展开剂为苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-氨水(6∶3∶1.5∶1.5∶0.5)，激发波长Ex＝365nm，发射波长Em＝409nm。结果盐酸小檗碱在0.473～3.784μg范围内线性关系良好，r＝0.9993。黄连的回收率为99.03%，RSD＝1.86%。香连丸的回收率为97.10%，RSD＝1.09%。结论该法操作简便，分离效果好，灵敏度高。

　　【关键词】黄连；香连丸；荧光分光光度法；盐酸小檗碱；含量测定

　　Keywords：CoptischinensisFranch.；XianglianPills；fluorescencespectrophotometry；berberinehydrochloride；contentdetermination

　　黄连为毛茛科植物黄连(CoptischinensisFranch.)、三角叶黄连(CoptisdeltoidesC.Y.ChengetHsiao)或云连(CoptisteetaWall.)的干燥根茎，具有清热燥湿、抗菌消炎、利胆等功效，临床上用于治疗消化道感染、泻痢等疾病。以黄连作原料的中成药香连丸气微、味苦，具有清热燥湿、行气止痛等功效，临床多用于湿热痢疾、里急后重、腹痛泄泻、菌痢、肠炎等症。盐酸小檗碱为两者共有的有效成分，具有抗菌、抗病毒、抗凝等作用，治疗原发性高血压、糖尿病等疾病。本试验采用薄层色谱-荧光分光光度法测定黄连和香连丸中盐酸小檗碱的含量，为其质量控制提供依据。

　　1仪器与试药

　　RF-5000荧光分光光度计(日本岛津)，UV-1型三用紫外分析仪(上海顾村电光仪器厂)，AG135(四川时运成套仪器有限公司)，80-2离心沉淀器(上海手术器械厂)，CQ-250超声波清洗机(昆山市超声仪器有限公司)。

　　盐酸小檗碱对照品(中国药品生物制品检定所，批号0713-9906)；黄连(贵州，批号20060424；四川，批号20060827、20070422)。药材经本校资源鉴定教研室姚振生教授鉴定为黄连CoptischinensisFranch.；香连丸(湖北诺得胜制药有限公司，批号061001、070101；湖北瑞华制药有限责任公司，批号060117)。硅胶G(青岛海洋化工有限公司，批号050428)；其他试剂均为分析纯。

　　2方法与结果

　　2.1对照品溶液和供试品溶液的制备

　　精密称定干燥至恒重的盐酸小檗碱对照品4.73mg，置于10mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得浓度为0.473mg/mL的对照品溶液。

　　取黄连药材粗粉约0.1g，精密称定，置100mL容量瓶中，加盐酸-甲醇(1∶100)溶液约95mL，60℃水浴加热15min，取出，超声处理30min，室温放置过夜，加甲醇至刻度，滤过，滤液作为黄连供试品溶液[1]。

　　精密称取香连丸约0.4g，加适量盐酸-甲醇(1∶100)溶液，索式回流提取至无色，提取液置水浴上蒸至约20mL，定量转移至50mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为香连丸供试品溶液[2]。

　　2.2薄层分析条件[3]

　　用0.3%CMC-Na为粘合剂自制硅胶G板，取对照品溶液适量，点样后用氨水饱和30min，以苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-氨水(6∶3∶1.5∶1.5∶0.5)为展开剂，展距10cm，晾干后置紫外光(365nm)下检视，盐酸小檗碱呈黄绿色荧光斑点(Rf＝0.40)。

　　2.3荧光条件的确定

　　取对照品溶液，用荧光分光光度计扫描，结果显示，盐酸小檗碱最大激发波长Ex＝365nm，最大发射波长Em＝409nm。

　　取对照品溶液1mL，分别加入不同体积的1mol/LNaOH溶液，并用甲醇定容至2mL，在Ex＝365nm、Em＝409nm处测定其荧光强度。结果表明，随着NaOH量的增加，其荧光强度不断增大，当加入50μL时荧光强度最大，此后继续增加NaOH用量时其荧光强度变化不大。故试验中确定NaOH加入量为50μL。

　　2.4线性关系考察

　　分别吸取对照品溶液1.0、2.0、4.0、5.0、6.0、8.0μL，间隔1.5cm依次点于同一硅胶G板上，按“2.2”项下条件展开，将相应斑点刮入离心管中，同行空白。各斑点用甲醇洗脱并将洗脱液依次转移至2mL容量瓶中，加入1mol/LNaOH溶液50μL，甲醇定容，摇匀，在Ex＝365nm、Em＝409nm处测定荧光强度，以荧光强度为纵坐标，盐酸小檗碱含量为横坐标，得回归方程为：Y＝10.337X－1.897，r＝0.9993，表明盐酸小檗碱在0.473～3.784μg范围内荧光强度与其含量线性关系良好。

　　2.5精密度试验

　　2.5.1同板精密度

　　精密吸取对照品溶液10μL，点于同一硅胶G板上，呈等距离的6个点，按“2.4”项下方法测定，结果RSD＝1.34%。

　　2.5.2异板精密度

　　精密吸取对照品溶液10μL，点于6个不同的硅胶G板上，按“2.4”项下方法测定，结果RSD＝2.55%。

　　2.6稳定性试验

　　取同一份对照品洗脱液，每隔20min测定一次荧光强度，连续测定7次，结果RSD＝1.50%，表明盐酸小檗碱在该条件下2h内稳定性良好。

　　2.7重复性试验

　　取黄连(批号20060827)和香连丸(批号061001)各5份，按“2.1”项下方法提取，并按“2.4”项下方法测定，结果黄连中盐酸小檗碱平均含量为8.04%，RSD＝1.49%；香连丸中盐酸小檗碱平均含量为3.47%，RSD＝2.39%。表明本法重复性良好。

　　2.8样品含量测定

　　精密吸取对照品溶液及黄连、香连丸提取液各10、20、10μL，分别点于同一硅胶板上，按“2.2”项下条件展开，将相应斑点刮入离心管中，加入甲醇1.5mL，振摇5min，超声15min，3000r/min离心10min，取上清液，置2mL容量瓶中，加入1mol/LNaOH溶液50μL，甲醇定容，摇匀，测定其荧光强度，平行测定3次。结果见表1。表1黄连和香连丸中盐酸小檗碱含量测定结果(略)

　　2.9加样回收率试验

　　精密称取已知含量的黄连约0.1g(批号20060827)及香连丸约0.4g(批号061001)，各6份，分别加入适量的盐酸小檗碱对照品溶液，按“2.1”及“2.4”项下方法操作，测定其含量，计算回收率，结果见表2。表2黄连和香连丸中盐酸小檗碱加样回收率试验结果(略)

　　3讨论

　　本试验曾分别采用乙醇和盐酸-甲醇(1∶100)溶液对样品进行提取，结果发现，采用乙醇提取时，小檗碱提取率不佳，在本试验薄层展开条件下，难以达到理想的分离效果；而采用盐酸-甲醇(1∶100)溶液提取时，黄连及香连丸中小檗碱与盐酸反应形成生物碱盐，使其溶解度增加，提取较为完全，且在本试验薄层展开条件下能较好的分离，故选用盐酸-甲醇(1∶100)溶液作为提取溶剂。

　　目前，盐酸小檗碱的含量测定方法有薄层色谱法、紫外分光光度法、高效液相色谱法等[4-5]，由于本试验样品成分复杂，干扰较大，采用薄层色谱法、紫外分光光度法进行含量测定往往背景干扰大，重现性差；而高效液相色谱法易造成色谱

　　柱的钝化。荧光分光光度法具有灵敏性高、选择性强、试验样品量少、设备简单的特点，适用于痕量成分的检测。本试验采取薄层色谱-荧光分光光度法，可以减少盐酸小檗碱衍生物等成分的干扰，简便、有效、回收率高，适用于黄连和香连丸的质量控制。

　　【参考文献】1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社，2005.213.

　　[2]周华平，宋广聪，王仁英.薄层扫描法测定香连丸中盐酸小檗碱的含量[J].基层中药杂志，2000，14(5)：15－16.

　　[3]杨广德，杨二库，王嗣岑.薄层色谱-荧光分光光度法测定黄连中小檗碱的含量[J].西北药学杂志，2000，15(4)：159.

　　[4]梁生旺.中药制剂分析[M].北京：中国中医药出版社，2004.115－118.

　　[5]桑媛，张冬海.黄柏胶囊中小檗碱含量的分光光度分析[J].中国药业，2006，15(5)：50.

篇十二：黄连粉的薄层色谱鉴别实验报告

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　　黄莲鉴定实验报告

　　篇一：实验黄连中小檗碱的提取、精制和鉴定

　　实验四黄连中小檗碱的提取、精制和鉴定

　　一、概述

　　黄连系毛茛科黄连属植物黄连（coptischinensis

　　Eranch.）的干燥根茎。黄连具有清热燥湿、清心除烦，泻

　　火解毒的功效。黄连的有效成分主要是生物碱，已分离出的

　　主要生物碱有小檗碱（berberine）、掌叶防己碱（palmatine）、

　　黄连碱（jatrorrhizine）等。小檗碱有很强的抗菌作用，

　　已广泛地应用于临床。

　　主要化学成分的结构及理化性质：

　　小檗碱为黄色针状结晶，mp为154℃，游离的小檗碱能

　　缓缓溶于水（1：20）及乙醇中（1：100），易溶于热水及热

　　醇，难溶于乙醚，石油醚、苯、三氯甲烷等有机溶剂，其盐

　　在水中溶解度很小，尤其是盐酸盐。盐酸盐为l：500，枸橼

　　酸盐1：125，酸性硫酸盐1：100，硫酸盐l：30，但在热水

　　中都比较容易溶解。

　　小檗碱常以季铵碱形式存在，碱性强（pka11.53），能

　　溶于水中，其水溶液有三种互变形式。

　　NHCHO

　　OCH33

　　3OCH3

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　　季铵式（红棕色）醇式（黄色）醛式（黄色）N+OCH3OCH3小檗碱（黄连素）二、实验部分（一）实验目的1、掌握小檗碱的结构特点和理化性质，以及一般的提取精制方法。2、掌握旋转蒸发仪的使用。3、熟悉盐酸小檗碱的色谱鉴定和定性鉴定方法。（二）实验原理1、提取原理：小檗碱为异喹啉类小檗碱，结构中的氮原子以季铵盐形式存在，显一定程度的亲水性，因此游离小檗碱能溶与水(1:20)及乙醇(1:100)，热水或热乙醇中易溶，不溶于乙醚、氯仿、苯等有机溶剂。盐酸小檗碱在沸水中溶解，在冷水中析出。2、分离原理：小檗碱与酸所成的盐在水中的溶解度不尽相同，如硫酸小檗碱为(1:30)，酸性硫酸小檗碱为(1:100)，枸橼酸小檗碱为(1:125)，而盐酸小檗碱为(1:500)。本实验就是据游离小檗碱在水和乙醇中的溶解度较大，而其盐酸盐难溶于水的性质进行提取和精制的。

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　　（三）实验药材、仪器与试剂1、药材：黄连50g（每组）。2、仪器：回流装置、水浴锅、冰箱、旋转蒸发仪、烧杯（250ml）、抽滤装置、滤纸、层析缸、滤纸、试管、电炉。3、试剂：75%乙醇、95%乙醇、蒸馏水、10%盐酸、氯化钠、乙醇、氯仿-甲醇-1/10盐酸（1:1:1）、10%硫酸、漂白粉、10%氢氧化钠、丙酮。（四）实验内容1、小檗碱的提取取黄连粗粉50g，加入400ml75%的乙醇回流1.5h，四层纱布过滤，药渣用95%乙醇300ml回流1h，四层纱布过滤，并用少量蒸馏水洗涤药渣，合并两次滤液和洗液，放于冰箱中。2、小檗碱的浓缩用旋转蒸发仪将小檗碱提取液浓缩至糖浆状（小于50ml，无醇味）。3、盐酸小檗碱的制备将浓缩液倒入100ml沸水中（换成250ml烧杯）煮沸至溶解（10min），趁热抽滤，在滤液中加10%盐酸，调制pH=2，加入氯化钠10g，放入冰箱析晶。4、盐酸小檗碱的精制（1）抽滤，得到盐酸小檗碱粗品。

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　　（2）取粗品放入100ml沸水中，搅拌溶解，继续加热10min，趁热抽滤，滤液放置过夜。（滤取结晶，先用少量1%盐酸洗一次，再用少量蒸馏水洗数次，抽干，干燥后得到小檗碱精品。）

　　5、鉴定（1）化学检识①取盐酸小檗碱少许，加10%的H2SO42ml，溶解后加漂白粉少许，即显樱红色。②取盐酸小檗碱约50mg，加蒸馏水5ml，水浴加热，溶解后加10%氢氧化纳试液2滴，显橙色。溶液放冷过滤，取澄清滤液，加丙酮4滴，即发生浑浊。放置后，生成黄色的丙酮小檗碱沉淀。（2）纸层析鉴定样品：1%醇溶液。（每组0.1g溶于10ml乙醇）标准品：1%盐酸小檗碱醇溶液展开剂：氯仿—甲醇—1/10MHCL(1:1:1下行)显色：自然光下观察（五）实验注意事项1、提取时两次乙醇浓度不等，提醒学生不要加错。2、漂白粉加少许即可，否则影响结果3、纸条要保持平整，不靠壁。

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　　（六）思考题1、小檗碱为哪类生物碱，可以用什么方法提取？2、回流与蒸馏的区别是什么？3、小檗碱精制的原理是什么？4、旋转蒸发仪使用时需注意哪些问题？篇二：实验三黄连中盐酸小檗碱的提取分离与鉴定实验三黄连中盐酸小檗碱的提取分离与鉴定小檗碱又称黄连素，是在高等植物中分布比较广泛的、有明显生理活性的化学成分。主要存在于黄连、黄柏、三颗针等中草药中。小檗碱具有显著的抗微生物、抗原虫的作用，临床用其盐酸盐（即盐酸黄连素）治疗细菌性感染如痢疾、急性肠胃炎、呼吸道感染等症。黄连为毛茛科黄连属植物黄连（CoptischinensisFranch。），三角叶黄连（C。deltoideaC。Y。ChengetHsiao）或云连（C。teetoidesC。Y。Cheng）的根茎，含有小檗碱(1)、巴马汀(2)、黄连碱(3)、甲基黄连碱(4)、药根碱(5)等生物碱，其中以小檗碱含量最高，可达10%左右，小檗碱以盐酸盐的形式存在于黄连中。目前制药工业提取小檗碱主要以三颗针为原料。三颗针来源于小檗科小檗属（Berberis）多种植物，其根皮含生物碱约2%，主要含小檗碱、小檗胺、药根碱、巴马汀等生物碱。R1R2R3R4R5

篇十三：黄连粉的薄层色谱鉴别实验报告

P>　　取黄连药材粗粉约01g精密称定置100ml容量瓶中加盐酸甲醇1100溶液约95ml60水浴加热15min取出超声处理30min室温放置过夜加甲醇至刻度滤过滤液作为黄连供试品溶液精密称取香连丸约04g加适量盐酸甲醇1100溶液索式回流提取至无色提取液置水浴上蒸至约20ml定量转移50ml容量瓶中加甲醇稀释至刻度摇匀作为香连丸供试品溶液22薄层分析条件用03cmcna为粘合剂自制硅胶g板取对照品溶液适量点样后用氨水饱和30min以苯乙酸乙酯异丙醇甲醇氨水63151505为展开剂展距10cm晾干后置紫外54chinesejournaltcmoct2008vol15no10光365nm下检视盐酸小檗碱呈黄绿色荧光斑点rf040

　　关于薄层色谱-荧光分光光度法测定黄连及香连丸中盐酸小檗碱的含量

　　【摘要】目的建立黄连和香连丸中盐酸小檗碱的含量测定方法。方法样品经提取、薄层展开后，采用薄层色谱-荧光分光光度法对黄连和香连丸中盐酸小檗碱进行含量测定，展开剂为苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-氨水(6∶3∶1.5∶1.5∶0.5)，激发波长Ex＝365nm，发射波长Em＝409nm。结果盐酸小檗碱在0.473～3.784μg范围内线性关系良好，r＝0.9993。黄连的回收率为99.03%，RSD＝1.86%。香连丸的回收率为97.10%，RSD＝1.09%。结论该法操作简便，分离效果好，灵敏度高。

　　【关键词】黄连；香连丸；荧光分光光度法；盐酸小檗碱；含量测定

　　Keywords：CoptischinensisFranch.；XianglianPills；fluorescencespectrophotometry；berberinehydrochloride；contentdetermination

　　黄连为毛茛科植物黄连(CoptischinensisFranch.)、三角叶黄连(CoptisdeltoidesC.Y.ChengetHsiao)或云连(CoptisteetaWall.)的干燥根茎，具有清热燥湿、抗菌消炎、利胆等功效，临床上用于治疗消化道感染、泻痢等疾病。以黄连作原料的中成药香连丸气微、味苦，具有清热燥湿、行气止痛等功效，临床多用于湿热痢疾、里急后重、腹痛泄泻、菌痢、肠炎等症。盐酸小檗碱为两者共有的有效成分，具有抗菌、抗病毒、抗凝等作用，治疗原发性高血压、糖尿病等疾病。本试验采用薄层色谱-荧光分光光度法测定黄连和香连丸中盐酸小檗碱的含量，为其质量控制提供依据。

　　1仪器与试药

　　RF-5000荧光分光光度计(日本岛津)，UV-1型三用紫外分析仪(上海顾村电光仪器厂)，AG135(四川时运成套仪器有限公司)，80-2离心沉淀器(上海手术器械厂)，CQ-250超声波清洗机(昆山市超声仪器有限公司)。

　　盐酸小檗碱对照品(中国药品生物制品检定所，批号0713-9906)；黄连(贵州，批号20060424；四川，批号20060827、20070422)。药材经本校资源鉴定教研室姚振生教授鉴定为黄连CoptischinensisFranch.；香连丸(湖北诺得胜制药有限公司，批号061001、070101；湖北瑞华制药有限责任公司，批号060117)。硅胶G(青岛海洋化工有限公司，批号050428)；其他试剂均为分析纯。

　　2方法与结果

　　2.1对照品溶液和供试品溶液的制备

　　精密称定干燥至恒重的盐酸小檗碱对照品4.73mg，置于10mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得浓度为0.473mg/mL的对照品溶液。

　　取黄连药材粗粉约0.1g，精密称定，置100mL容量瓶中，加盐酸-甲醇(1∶100)溶液约95mL，60℃水浴加热15min，取出，超声处理30min，室温放置过夜，加甲醇至刻度，滤过，滤液作为黄连供试品溶液[1]。

　　精密称取香连丸约0.4g，加适量盐酸-甲醇(1∶100)溶液，索式回流提取至无色，提取液置水浴上蒸至约20mL，定量转移至50mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为香连丸供试品溶液[2]。

　　2.2薄层分析条件[3]

　　用0.3%CMC-Na为粘合剂自制硅胶G板，取对照品溶液适量，点样后用氨水饱和30min，以苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-氨水(6∶3∶1.5∶1.5∶0.5)为展开剂，展距10cm，晾干后置紫外光(365nm)下检视，盐酸小檗碱呈黄绿色荧光斑点(Rf＝0.40)。

　　2.3荧光条件的确定

　　取对照品溶液，用荧光分光光度计扫描，结果显示，盐酸小檗碱最大激发波长Ex＝365nm，最大发射波长Em＝409nm。

　　取对照品溶液1mL，分别加入不同体积的1mol/LNaOH溶液，并用甲醇定容至2mL，在Ex＝365nm、Em＝409nm处测定其荧光强度。结果表明，随着NaOH量的增加，其荧光强度不断增大，当加入50μL时荧光强度最大，此后继续增加NaOH用量时其荧光强度变化不大。故试验中确定NaOH加入量为50μL。

　　2.4线性关系考察

　　分别吸取对照品溶液1.0、2.0、4.0、5.0、6.0、8.0μL，间隔1.5cm依次点于同一硅胶G板上，按“2.2”项下条件展开，将相应斑点刮入离心管中，同行空白。各斑点用甲醇洗脱并将洗脱液依次转移至2mL容量瓶中，加入1mol/LNaOH溶液50μL，甲醇定容，摇匀，在Ex＝365nm、Em＝409nm处测定荧光强度，以荧光强度为纵坐标，盐酸小檗碱含量为横坐标，得回归方程为：Y＝10.337X－1.897，r＝0.9993，表明盐酸小檗碱在0.473～3.784μg范围内荧光强度与其含量线性关系良好。

　　2.5精密度试验

　　2.5.1同板精密度

　　精密吸取对照品溶液10μL，点于同一硅胶G板上，呈等距离的6个点，按“2.4”项下方法测定，结果RSD＝1.34%。

　　2.5.2异板精密度

　　精密吸取对照品溶液10μL，点于6个不同的硅胶G板上，按“2.4”项下方法测定，结果RSD＝2.55%。

　　2.6稳定性试验

　　取同一份对照品洗脱液，每隔20min测定一次荧光强度，连续测定7次，结果RSD＝1.50%，表明盐酸小檗碱在该条件下2h内稳定性良好。

　　2.7重复性试验

　　取黄连(批号20060827)和香连丸(批号061001)各5份，按“2.1”项下方法提取，并按“2.4”项下方法测定，结果黄连中盐酸小檗碱平均含量为8.04%，RSD＝1.49%；香连丸中盐酸小檗碱平均含量为3.47%，RSD＝2.39%。表明本法重复性良好。

　　2.8样品含量测定

　　精密吸取对照品溶液及黄连、香连丸提取液各10、20、10μL，分别点于同一硅胶板上，按“2.2”项下条件展开，将相应斑点刮入离心管中，加入甲醇1.5mL，振摇5min，超声15min，3000r/min离心10min，取上清液，置2mL容量瓶中，加入1mol/LNaOH溶液50μL，甲醇定容，摇匀，测定其荧光强度，平行测定3次。结果见表1。表1黄连和香连丸中盐酸小檗碱含量测定结果(略)

　　2.9加样回收率试验

　　精密称取已知含量的黄连约0.1g(批号20060827)及香连丸约0.4g(批号061001)，各6份，分别加入适量的盐酸小檗碱对照品溶液，按“2.1”及“2.4”项下方法操作，测定其含量，计算回收率，结果见表2。表2黄连和香连丸中盐酸小檗碱加样回收率试验结果(略)

　　3讨论

　　本试验曾分别采用乙醇和盐酸-甲醇(1∶100)溶液对样品进行提取，结果发现，采用乙醇提取时，小檗碱提取率不佳，在本试验薄层展开条件下，难以达到理想的分离效果；而采用盐酸-甲醇(1∶100)溶液提取时，黄连及香连丸中小檗碱与盐酸反应形成生物碱盐，使其溶解度增加，提取较为完全，且在本试验薄层展开条件下能较好的分离，故选用盐酸-甲醇(1∶100)溶液作为提取溶剂。

　　目前，盐酸小檗碱的含量测定方法有薄层色谱法、紫外分光光度法、高效液相色谱法等[4-5]，由于本试验样品成分复杂，干扰较大，采用薄层色谱法、紫外分光光度法进行含量测定往往背景干扰大，重现性差；而高效液相色谱法易造成色谱

　　柱的钝化。荧光分光光度法具有灵敏性高、选择性强、试验样品量少、设备简单的特点，适用于痕量成分的检测。本试验采取薄层色谱-荧光分光光度法，可以减少盐酸小檗碱衍生物等成分的干扰，简便、有效、回收率高，适用于黄连和香连丸的质量控制。

　　【参考文献】1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社，2005.213.

　　[2]周华平，宋广聪，王仁英.薄层扫描法测定香连丸中盐酸小檗碱的含量[J].基层中药杂志，2000，14(5)：15－16.

　　[3]杨广德，杨二库，王嗣岑.薄层色谱-荧光分光光度法测定黄连中小檗碱的含量[J].西北药学杂志，2000，15(4)：159.

　　[4]梁生旺.中药制剂分析[M].北京：中国中医药出版社，2004.115－118.

　　[5]桑媛，张冬海.黄柏胶囊中小檗碱含量的分光光度分析[J].中国药业，2006，15(5)：50.

篇十四：黄连粉的薄层色谱鉴别实验报告

P>　　实验十七黄连药材的薄层色谱法鉴别

　　一、目的要求

　　1．掌握薄层硬板的制备方法

　　2．掌握薄层色谱的一般操作方法

　　3．了解薄层色谱在中药分析中的应用

　　二、实验原理

　　中药黄连中主要有效成分为小檗碱等生物碱类成分，利用薄层色谱可将药材中各成分分离，用盐酸小檗碱对照品加以对照，可起到鉴别黄连的作用。

　　三、仪器与试剂

　　1．仪器

　　双槽层析缸、玻璃板10cm×20cm（厚0.5mm）、定量毛细管（2μl）、薄层涂布器、研钵、分析天平。

　　2．试剂

　　薄层层析用硅胶G、盐酸小檗碱对照品（中国药品生物制品检定所）、黄连药材，其它试剂均为分析纯

　　四、实验内容与步骤

　　1．硅胶G薄层板的制备

　　称取硅胶G1份和0.7%的CMC-Na2.5份在研钵中同一方向研磨混匀，除去气泡后，倒入涂布器中，在玻璃板上平稳移动涂布器进行涂布（厚度为0.5mm），涂好的薄层板置立平台上晾干，于105-110℃烘30分钟，置干燥器中备用。

　　2．供试品溶液的制备

　　取本品粉末约0.1g，置100ml容量瓶中，加入盐酸-甲醇（1：100）约95ml，60℃水浴中加热15分钟，取出，超声处理30分钟，室温放置过夜，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液。

　　3．对照品溶液的制备

　　取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每1mL含0.05mg的溶液，作为对照品溶液。

　　4．点样

　　吸取供试品溶液2μl和对照品溶液4μl，分别交叉点于同一硅胶G薄层板上。

　　一般用定量毛细管点样于薄层板上，点样形状为圆点，点样基线距底边1.5cm，点样直径不大于2mm，点样间距1.5cm。

　　5．展开

　　点好样的薄层板放入展开缸中，以苯-醋酸乙酯-甲醇-异丙醇-水（12：6：3：3：0.6）为展开剂，在另槽中加入2ml浓氨试液，展开，展距约10cm，取出，晾干。

　　6．检出

　　将薄层板置紫外光灯（365nm）下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同的一个黄色荧光斑点。

　　五、注意事项

　　1．点样直径一般不大于2mm

　　2．点样时注意勿损伤薄层表面。

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