EB病毒抗体诊断方法研究进展
[摘要] EB病毒与鼻咽癌密切相关，通过检测血清EB病毒抗体可为鼻咽癌筛查和早期诊断提供辅助性指标。近年来，各种血清EB病毒抗体检测方法相继产生，全文就EB病毒抗体诊断方法研究进展作一综述。
[关键词] EB病毒；鼻咽癌；抗体诊断；研究进展
[中图分类号] R446.6 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2013）03（b）-0021-02
EB病毒（Epstein-Barr virus，EBV）是一种能普遍感染人类且与多种恶性肿瘤发病有密切关系的DNA病毒。由于人类容易感染EB病毒，EB病毒感染导致的相关疾病，特别是恶性肿瘤的发病越来越受到研究人员的关注。自外国医学研究人员Old LJ等[1]报告使用免疫扩散实验确认EB病毒和鼻咽癌的血清学有关以来， 后来诸多研究均发现抗EB病毒壳抗原的免疫球蛋白对鼻咽癌诊断有特异性。近年来，随着检验技术的发展和在临床上的大量应用，国内外学者对鼻咽癌患者血清EB病毒抗体诊断方法作了大量研究。
1 血清EB病毒抗体诊断方法研究进展
1.1 EB病毒不同检测方法
长期的临床研究发现EB病毒感染人体后，被病毒感染的人体细胞具有EB病毒的基因组，并产生相应的各种抗原，已确定的被病毒感染细胞可合成抗原有：①核抗原（EB virus asso-ciated nuclear antigen，EBNA）；②膜抗原（membrane antigen of Epstien-Barr virus，MA）；③早期抗原（early intracellular antigen，EA）；④衣壳抗原（EB virus cap sid antigen，VCA）；⑤淋巴细胞识别膜抗原（LYDMA）。由于抗原产生后机体会出现相应的抗体，通过血清EB病毒抗体的检测可为临床诊断提供依据，目前有大量报道显示测定单个EB病毒抗原的抗体相比联合测定多个抗体对鼻咽癌的诊断的特异性及灵敏度偏低，不能为临床诊断提供准确的数据，为提高检验的准确性，现多采用多个抗体联合检测及联合分析的方法。
近年来，随着检验技术的发展及对鼻咽癌认识的提高，检测EB病毒以辅助诊断鼻咽癌的方法越来越多，如免疫荧光和免疫酶法、酶中和分析、免疫印迹、免疫斑点、酶联免疫吸附试验（ELISA）和聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction， PCR）等，其中建立使用的ELISA及PCR检测EB病毒最受重视，ELISA相比其他检测方法在鼻咽癌检测、筛查方面特异性和敏感度均较高，操作更加简单、快捷，且能自动化运行、检验结果易判断。因此，此方法能有效提高工作效率，又能保证检验数据的准确度。
1.2 EB病毒不同抗体的检测及临床价值
对于鼻咽癌， EB病毒不同抗体其特异性与灵敏度存在差异。贾宁人等[2]对EBV感染后产生的急性反应蛋白衣壳抗原蛋白（VCA）的血清抗体进行了检测，观察表明抗VCA-IgA抗体在鼻咽癌组的阳性率高达69.2%，抗鼻咽癌组VCA-IgM表现为低阳性率，仅有7.7%。陈云等[3]用ELISA法定量检测血清标本中EBV特异性VCA-IgA和EA-IgA抗体水平，研究显示，联合检测EBV特异性VCA-IgA和EA-IgA诊断鼻咽癌，其阳性预测值达到99%，但阴性预测值只有43%。李筱莉等[4]收集300例鼻咽癌患者血清、鼻咽良性疾病91例及可能与EB病毒感染有关的其他癌症患者100例，用ELISA法检测血清VCA-IgA、EA-D-IgG和EA-D-IgA 3种抗体发现，联合检测VCA-IgA和EA-D-IgG有互补作用，二者平行联合检测可提高鼻咽癌血清学诊断及筛查的敏感性，序列联合检测可提高鼻咽癌血清学筛查的特异性。郭丽萍等[5]联合检测EB病毒VCA-IgA和Rta-IgG抗体用于筛查鼻咽癌高危人群，研究表明从序列测定获得的双项阳性血清中筛查到的鼻咽癌比率高于单项VCA-IgA阳性血清。梁惠陶等[6]采用酶联免疫吸附法检测健康人群EB病毒IgA抗体，检查得出IgA抗体阳性率随着年龄的增长而增多。
临床还报道，采用比较新的检验技术如用重组的EB病毒抗原对鼻咽癌进行血清学诊断，这些重组抗原有DNA聚合酶、胸苷激酶、核苷酸还原酶及复制激活剂Zta等。实验室采用ELISA检测EBNA1-IgA、EBNA1-IgG和Zta-IgG进行鼻咽癌筛查的文献报道比较多，然而，各临床文献报道的检测分析结果存在一定差异。胡维维等[7]对EBNA1-IgA、EBNA1-IgG、Zta-IgA、Zta-IgG、VCA-p18-IgA和VCA-p18-IgG 6种酶联免疫吸附检测在血清学诊断鼻咽癌中的应用，探讨哪种ELISA组合更为有效，研究表明临床血清学诊断鼻咽癌，首选Zta-IgG或EBNA1-IgA；同时检测两种ELISA，宜采用Zta-IgG、EBNA1-IgA或Zta-IgG、EBNA1-IgG；三种ELISA同时检测，可以提高特异度。因此推荐Zta-IgG、EBNA1-IgA、EBNA1-IgG或Zta-IgG、EBNA1-IgG、Zta-IgA 3项。易冰等[8]研究用ELISA法检测血清中的EBNA1-IgA、EBNA1-IgG、VCA-p18-IgA、VCA-p18-IgG、Zta-IgA和Zta-IgG等6种抗体水平，比较不同抗体组合时中山籍贯和外省籍贯两类人群样本的抗EB病毒抗体谱的差别，结果显示中山原住居民感染的EB病毒常常处于激活状态，而外省籍贯的中山临时市民感染的EB病毒处于潜伏期时表达的EBNA1水平更高。程伟民等[9] 采用ELISA检测血清中EBNA 1/IgA、EBNA 1/IgG和Zta/IgG，结果显示 EBNA 1/IgA、EBNA 1/IgG和Zta/IgG的敏感度分别为85%、83%和79%；三者组合的敏感度最高，为92%；EBNA 1/IgA、EBNA 1/IgG和zta/IgG的特异度分别为86%、86%和80%；三者组合的特异度最高，为93%。EBNA 1/IgA、EBNA 1/IgG和zta/IgG的联合应用可以评估人群患鼻咽癌的危险度。易翔等[10]用免疫印迹法检测鼻咽癌病人血清中抗EB病毒Zta-IgG抗体，结果显示鼻咽癌组血清Zta-IgG阳性率为91.7%，对照组中10.7%Zta-IgG阳性，两组差异有统计学意义（P < 0.001）。免疫印迹法检测鼻咽癌患者血清中Zta-IgG抗体有较高的敏感性和特异性，可以作为鼻咽癌患者诊断筛选的指标。沈亚华等[11]对在中山市人民医院进行健康体检的12 991名成人用ELISA法同时检测血清中的EBNA1-IgA、EBNA1-IgG、Zta-IgG三种抗体水平，结果显示鼻咽癌检出率分别为76.98/100000，7.698/100000和0/10，低危人群鼻咽癌检出率最低。
ZE-BRA蛋白是调节EBV从潜伏状态进入复制状态的关键。NPC细胞中ZE-BRA蛋白表达提示EBV处于活跃的复制状态。郑裕明等[12]在应用ELISA法检测鼻咽癌新发病例、鼻咽癌治疗后复诊病例、EB病毒VCA/IgA抗体阳性及阴性正常人群中的ZE-BRA/IgG抗体，研究结果显示，鼻咽癌新发病例ZE-BRA/IgG的阳性率为92.7%，显著高于其他各组（P < 0.001），结果提示ELISA法检测ZE-BRA/IgG诊断鼻咽癌的特异性较常规免疫酶法检测明显提高；同时亦发现，VCA/IgA抗体阴性人群中，有2%的个体呈现ZE-BRA/IgG抗体阳性，这是否是其体内EB病毒抗原表达形式的差异所致，值得进一步研究。有研究者还采用ELISA方法检测早期基因BRLF1基因编码的Rta蛋白。Chang Y等[13]用ELISA法检测血清中的Rta蛋白，发现异位的Rta蛋白能够诱导LMP1在上皮细胞和淋巴细胞中表达。朱文良等[14]应用Rta蛋白作为抗原，用ELISA法检测血清中的Rta蛋白抗体IgG，灵敏度达82.12%，特异度为91.78%，结果表明Rta-IgG具有比较高的灵敏度和特异度，可以用于鼻咽癌的临床检测和筛查。蔡永林等[15]用ELISA检测Rta/IgG、EBNA1/IgA抗体，提示EB病毒Rta/IgG抗体表达与鼻咽癌分期无关。
2 EB病毒基因诊断研究进展
鼻咽癌患者血清中EB病毒DNA分子水平与肿瘤的分期和临床进展有明显相关性，深入的研究发现鼻咽癌患者血浆存在着游离于细胞外的大量的EBV-DNA，并发现EBV-DNA随着肿瘤消长的变化而变化，故认为血浆EBV-DNA是肿瘤EB病毒裂解释放到血浆中去。Leung SF等[16]在比较鼻咽癌患者血浆EBV-DNA和VCA-IgA检出敏感性研究中发现， EBV-DNA检出敏感性为95%，研究结果提示鼻咽癌患者血清EBV-DNA的敏感性和特异性均高于VCA-IgA，可用于作为诊断鼻咽癌的重要指标，与李杰[17]报道相似。张力等[18]采用荧光定量PCR的方法检测鼻咽癌患者放射治疗后血浆EB病毒（EBV）DNA水平，结果表明，在10例复发或有远处转移的患者中，6例患者血浆中可检测到高水平的EBV-DNA，而在临床缓解组的15例患者中，仅1例患者的血浆中检测到低浓度的EBV-DNA，并且他们在随后的随访中又发现，疾病复发的患者在出现明显的临床症状的6个月前就已有血浆EBVDNA水平的升高。祝晓芬等[19]应用Real-time PCR方法检测EB病毒DNA含量，100例初治鼻咽癌患者、106例放疗后及40例健康对照者， 结果显示血浆中游离EB病毒DNA在初诊鼻咽癌者、放疗后转移和复发鼻咽癌者三组检出的阳性率分别为90.7%、96.5%和100.0%，而健康者的阳性率仅为7.5%，持续临床缓解者10%阳性；血浆EB病毒DNA定量检测对初诊鼻咽癌患者的诊断敏感性为97.0%，特异性为92.0%；另有3例持续临床缓解而血浆EB病毒DNA水平升高的鼻咽癌患者，在随后的6个月随访中，最终出现肿瘤复发或转移，说明血浆EBV-DNA定量检测是筛选NPC患者的敏感有效方法。Twu CW等[20]对114例鼻咽癌患者血清EBV-DNA进行检测分析，发现治疗前高水平的EBV-DNA比低水平者在4年总生存率和无复发生存率上的差异明显。廖莉娅等[21]分别采用实时荧光定量PCR法和酶联免疫吸附法检测34例NPC患者和30例健康体检者的EBV-DNA和EBVCA-IgA，34例鼻咽癌患者EBV-DNA阳性率为58.82%，EBVCA-IgA阳性率为44.12%，两者同时阳性为32.35%；30例健康体检者EBV-DNA阳性率为10%，EBVCA-IgA阳性率为3.33%，两者同时阳性为3.33%。结果提示患者血液白细胞EBV-DNA作为EB病毒的一种抗原物质，比EBVCA-IgA更能反映EBV在患者体内的实际情况，更适合在临床实验室使用。
3总结
通过对EB病毒与鼻咽癌的相关文献报道的复习可以看出，通过实验室检查血清EB病毒抗体对于鼻咽癌患者的筛选、诊断、疗效判断和复发监测均具有重要的指导意义。在鼻咽癌诊断方面，目前，实验室检查以联合检测早期抗原抗体和衣壳抗原抗体的方法应用最广；临床上报道的其他抗体检测，如ZE-BRA-IgG抗体也在实验室检测中逐步进行研究使用。联合各种对鼻咽癌的诊断、筛选有高敏感和高特异性的抗体指标进行辅助检查，将为临床诊断与治疗提供科学的依据。
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（收稿日期：2013-01-11 本文编辑：马 双）