当前位置: 简表范文网 > 专题范文 > 公文范文 >

银杏叶提取物对肠炎小鼠肠黏膜通透性的影响

| 来源:网友投稿

zoޛ)j馑@]5Auгb)ZاADԳ^4Ӎ6M:?M5`{QHL M<}CQO4?M5`{PjbZr[qQ�׮㽵MzִO4i--rدy:对照,时间均为1周,第8天处死所有动物。

1.2 小鼠一般情况及结肠病理组织染色

观察动物的体重、毛发光泽度、精神状态、大便性状、活动情况、食欲等。造模后处死小鼠,取部分结肠组织置于多聚甲醛内固定、包埋、切片,HE染色,行组织病理学观察。

1.3 脂多糖(LPS)含量的测定

实验结束后,应用注射器行心脏穿刺取血,取血后以3000 r/min离心15 min,取出血清,按试剂盒说明书应用偶氮基质显色法测定LPS含量。

1.4 结肠黏膜的通透性的检测

实验结束前4 h动物禁食水,应用FITC-D灌胃,(60 mg FITC-D/100 g),然后采取血清,应用荧光分光光度计检测每个样本的荧光密度,计算出每只小鼠血清中FITC-D的浓度。

1.5 肠系膜淋巴结细菌移位率的检测

实验结束后,用无菌剪刀剪取小鼠的全部肠系膜淋巴结(Mesenteric lymph nodes,MLN),称重后并匀浆,将匀浆组织各0.1 mL分别涂在普通琼脂培养基上37℃孵箱中培养24 h。计算细菌移位率,细菌移位率=(阳性的只数/培养的总只数)×100%。

1.6 结肠黏膜免疫组织化学及荧光染色

实验结束后,截取结肠组织行冰冻切片,严格按照实验步骤,一抗Claudin-1、occludin蛋白在37℃孵育2 h,洗涤,二抗37℃孵育30 min,结束后在光镜下观察Claudin-1、occludin蛋白的表达。免疫荧光染色:其他步骤同上,二抗滴加标记红色荧光的抗小鼠Cy3,室温1 h,红色的亮光为阳性表达。在阴性对照组中应用PBS替代一抗,其他的方法同上。

1.7 统计学方法

采用SPSS 13.0统计学软件进行数据分析,计量资料数据用均数±标准差(x±s)表示,两组间比较采用t检验;多组间比较采用单因素方差分析;计数资料用率表示,组间比较采用χ2检验,以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 小鼠的一般情况

正常组的小鼠大便、饮食、精神状态正常、体重增加、毛发光泽;模型组小鼠第1天一般状况较正常;第3天开始出现食欲、体重下降,精神萎靡,懒于活动,毛发无光泽,拉稀便或黏液血便;第5天上述各种症状明显加重,粪便潜血试验呈强阳性;第7天小鼠体重减轻明显,肛周可见肉眼血便。EGB 761组第5~7天后,稀便,未见脓血便,状态接近正常,但体重仍明显减轻。

2.2 EGB 761对小鼠结肠组织病理学表现的影响

正常组小鼠结肠黏膜光滑,无水肿、充血等表现;模型组结肠黏膜缺损,可见黏膜、黏膜下层大量炎症细胞浸润,隐窝增生;EGB 761组可见炎症细胞浸润少,炎症程度较模型组明显减轻。见图1。

2.3 EGB 761对血清LPS、细菌移位率及FITC-D渗透率的影响

与模型组比较,正常组及EGB 761组血清中LPS的含量、结肠黏膜FITC-D渗透率、细菌移位率明显降低(P < 0.01)。见表1。

2.4 免疫组织化学染色法检测Claudin-1、occludin蛋白定位分布

通过光镜观察正常组Claudin-1、occludin蛋白,阳性细胞主要呈棕黄色或褐色,分布于结肠组织上皮细胞的边缘以及细胞膜的顶端,均匀连续分布;模型组的蛋白分布不均染色变淡,线条模糊,边缘粗糙有刺状突起;EGB 761组Claudin-1、occludin蛋白在结肠黏膜上皮层中分布均匀,线条清晰。见图2~3。

2.5 免疫荧光染色检测结肠黏膜occludin和Claudin-1蛋白的定位分布

在激光共聚焦的显微镜下看到的Claudin-1和occludin蛋白均呈红色光亮,在正常组中Claudin-1、occludin蛋白染色可见红色的亮光沿细胞的胞膜分布,呈强光,细胞的胞膜边缘较光滑;在模型组中可见看到,红色的光亮沿细胞胞膜散在分布,荧光强度减弱;EGB 761组荧光仍沿胞膜分布,强度较强于模型组。见图4~5(封三)。

3 讨论

UC是一种病因不明的、高复发的肠道炎症性疾病,研究显示UC在各种微生物抗原刺激下,肠黏膜屏障通透性增高,使肠道致病菌群穿过黏膜屏障,激活体内免疫系统被激活,各种炎症细胞活化,肠黏膜组织产生炎性反应,而肠黏膜通透性,居于中心地位,可能是UC发病的始动因素,所以提高肠道黏膜屏障,降低其通透性可能为该病提供一个新思路。 在正常的情况下,肠道有完整的黏膜屏障,可以阻止有毒物质通过[13-16],UC发病时,肠黏膜屏障通透性增高[17-18]。

GBE 761广泛用于治疗呼吸系统、心脑血管系统等疾病,有调节循环系统、改善血液循环、保护组织等作用。GBE 761可通过抑制炎症细胞因子的表达,如肿瘤坏死因子-α、NF-κBp65、白介素-6,从而对大鼠实验性结肠炎具有保护作用,同时GBE 76灌肠也能抑制大鼠结肠炎的炎症细胞因子的分泌,减轻肠道炎性反应,减少肠黏膜的损伤[19-20]。

实验结果显示,GBE 761干预有促进动物食欲效果导致动物体重迅速增加;减少肠道出血和炎症细胞的浸润,正常组FITC-D含量、细菌移位率及LPS的含量降低。GBE 761干预使紧密连接蛋白分布于细胞边缘,沿细胞膜分布,加强了紧密连接,降低了黏膜的通透性;由此可见,GBE 761可降低肠黏膜通透性、降低肠道炎性反应,减轻肠黏膜病理反应,对UC的治疗有一定作用。

[参考文献]

[1] Dupont A,Kaconis Y,Yang I,et al. Intestinal mucus affinity and biological activity of an orally administered antibacterial and anti-inflammatory peptide [J]. Gut,2015,64(2):222-232.

[2] Long TM,Nisa S,Donnenberg MS,Hassel BA. Enteropathogenic Escherichia coli inhibits type I interferon- and RNase L-mediated host defense to disrupt intestinal epithelial cell barrier function [J]. Infect Immun,2014,82(7):2802-2814.

[3] Edogawa S,Takeuchi T,Kojima Y,et al. Current Topics of Strategy of NSAID-Induced Small Intestinal Lesions [J]. Digestion,2015,92(2):99-107.

[4] Ma TM,Xu N,Ma XD,et al. Moxibustion regulates inflammatory mediators and colonic mucosal barrier in ulcerative colitis rats [J]. World J Gastroenterol,2016,22(8):2566-2575.

[5] Nowarski R,Jackson R,Gagliani N,et al. Epithelial IL-18 Equilibrium Controls Barrier Function in Colitis [J]. Cell,2015,163(6):1444-1456.

[6] Hartog A,Belle FN,Bastiaans J,et al. A potential role for regulatory T-cells in the amelioration of DSS induced colitis by dietary non-digestible polysaccharides [J]. J Nutr Biochem,2015,26(3):227-233.

[7] Valentini L,Ramminger S,Haas V,et al. Small intestinal permeability in older adults [J]. Physiol Rep,2014,2(4):e00281.

[8] Kume H,Okazaki K,Takahashi T,et al. Protective effect of an immune-modulating diet comprising whey peptides and fermented milk products on indomethacin-induced small-bowel disorders in rats [J]. Clin Nutr,2014,33(6):1140-1146.

[9] Zhang X,Jiang X. Effects of enteral nutrition on the barrier function of the intestinal mucosa and dopamine receptor expression in rats with traumatic brain injury [J]. JPEN J Parenter Enteral Nutr,2015,39(1):114-123.

[10] Rao YX,Chen J,Chen LL,et al. The impact of dietary methionine-restriction on tight junction expression and function in a rat colonitis mode [J]. Zhonghua Nei Ke Za Zhi,2013,52(6):503-509.

[11] Toumi R,Abdelouhab K,Rafa H,et al. Beneficial role of the probiotic mixture Ultrabiotique on maintaining the integrity of intestinal mucosal barrier in DSS-induced experimental colitis [J]. Immunopharmacol Immunotoxicol,2013,35(3):403-409.

[12] Molnár K,Vannay A,Sziksz E,et al. The role of intestinal alkaline phosphatase in pediatric inflammatory bowel and celiac diseases [J]. Orv Hetil,2012,153(35):1389-1395.

[13] Nowarski R,Jackson R,Gagliani N,et al. Epithelial IL-18 Equilibrium Controls Barrier Function in Colitis [J]. Cell,2015,163(6):1444-1456.

[14] Hartog A,Belle FN,Bastiaans J,et al. A potential role for regulatory T-cells in the amelioration of DSS induced colitis by dietary non-digestible polysaccharides [J]. J Nutr Biochem,2015,26(3):227-233.

[15] Rao YX,Chen J,Chen LL,et al. The impact of dietary methionine-restriction on tight junction expression and function in a rat colonitis mode [J]. Zhonghua Nei Ke Za Zhi,2013,52(6):503-509.

[16] Toumi R,Abdelouhab K,Rafa H,et al. Beneficial role of the probiotic mixture Ultrabiotique on maintaining the integrity of intestinal mucosal barrier in DSS-induced experimental colitis [J]. Immunopharmacol Immunotoxicol,2013,35(3):403-409.

[17] Sun T,Gao GZ,Li RF,et al. Bone marrow-derived mesenchymal stem cell transplantation ameliorates oxidative stress and restores intestinal mucosal permeability in chemically induced colitis in mice [J]. Am J Transl Res,2015, 7(5):891-901.

[18] Liu X,Xu J,Mei Q,et al. Myosin light chain kinase inhibitor inhibits dextran sulfate sodium-induced colitis in mice [J]. Dig Dis Sci,2013,58(1):107-114.

[19] Wang L,Zhang T,Bai K. System evaluation on Ginkgo Biloba extract in the treatment of acute cerebral infarction [J]. Zhong Nan Da Xue Xue Bao:Yi Xue Ban,2015, 40(10):1096-1102.

[20] Stark M,Behl C. The Ginkgo Biloba Extract EGb 761 Modulates Proteasome Activity and Polyglutamine Protein Aggregation [J]. Evid Based Complement Alternat Med,2014, 2014(1):746.

推荐访问:小鼠 黏膜 通透 肠炎 影响

热门文章

追梦筑梦圆梦演讲稿

最近发表了一篇名为《追梦筑梦圆梦演讲稿》的范文,感觉很有用处,这里给大家转摘到。演讲稿特别注重结构清楚,层次简明。在日新月异的现代社会中,在很多情况下需要用到演讲稿,如何写一份恰当的演讲稿呢?下面是小编为大家整理的追梦筑梦圆梦演讲稿,希望能够帮助到大家!追梦筑梦圆梦演讲稿1尊敬的

2022年度中考优秀作文素材别样美三篇

最近发表了一篇名为《中考优秀作文素材别样的美精选三篇》的范文,好的范文应该跟大家分享,看完如果觉得有帮助请记得(CTRL+D)收藏本页。雨过天晴,花坛边上,几只蜗牛缓缓的爬行着,留下一道彩虹般的痕迹,那柔软的外面,是坚硬的外壳,那也是一道的美丽。下面是小编为大家收集整理的关于素材别样的美精

《********大宣讲特别节目》直播观后感

最近发表了一篇名为《2022《********大宣讲特别节目》直播观后感【精选】》的范文,感觉写的不错,希望对您有帮助,希望对网友有用。,安全,在学校里,在校外,安全这个词恐怕是再熟悉不过了吧,让将安全铭记心中,时进刻刻都做到安全,让父母不再操心,让长辈不再担心,让安全从我做起,从身边

建团百周年活动策划

《2022建团百周年活动策划【精选】》是一篇好的范文,感觉很有用处,希望大家能有所收获。党的领导是共青团顺利发展的关键所在,无论是中国早期青年团的建立,还是中国共青团的正式成立,都离不开党的领导。下面小编为大家整理了2022建团百周年策划【精选】的相关内容,以供参考,希望给大家带来帮助!20

大一暑假社会实践报告(精选文档)

本页是最新发布的《2022大一暑假社会实践报告》的详细范文参考文章,感觉写的不错,希望对您有帮助,希望大家能有所收获。这个暑假过得是否充实呢,有些小伙伴在假期中参加了实践,那么如何做一份报告呢?下面是小编整理的2022大一暑假社会实践报告,仅供参考,希望能够帮助到大家。2022大一暑假社会

2022员工培训学习心得体会范本合集(范文推荐)

最近发表了一篇名为《员工培训学习心得体会范文》的范文,感觉写的不错,希望对您有帮助,为了方便大家的阅读。培训能让员工不断的提高,并清楚的意识到自己的缺点。经过员工培训,你一定有许多的收获,不妨来写一篇员工培训心得。你是否在找正准备撰写“员工培训心得体会范文”,下面小编收集了相关的素材,

2022不期而遇作文600字初中记叙文

《不期而遇作文600字初中记叙文》是一篇好的范文,感觉很有用处,希望对网友有用。,美词,像是袭袭的寒风慢慢轻掠大地,刺刺的,一缕****的阳光下有一小缕的橘红色静静的生长。下面是小编为大家收集整理的关于不期而遇600字初中记叙文,一起来看看吧!不期而遇作文600字篇一苏轼有语人间有味是清欢,或许正是

2022年度幼儿园清明节主题活动总结范本

《2022幼儿园清明节主题活动总结范文【精选】》是一篇好的范文,感觉很有用处,为了方便大家的阅读。,又称踏青节、行清节、三月节、祭祖节等,节期在仲春与暮春之交。清明节源自上古时代的祖先信仰与春祭礼俗,以下是小编整理的2022园清明节主题总结,希望可以提供给大家进行参考和借鉴。2022幼儿园清明节

2022年大学生档案自我鉴定300字10篇

2022年普通大学生个人社会实践实习报告精选服务社会做好思想准备和业务准备,公司内部电脑系统都是统一英文系统,就要求自己以职场……[详细]2022年党员思想汇报例文两篇【完整版】所以在以后的学习和生活中,经历过苦难的中国,工作以及生活中,特别是通过学习党章党纪……[详细]企业员工服务意识培训心得体会

以小见大作文500字范本(范文推荐)

最近发表了一篇名为《以小见大作文500字范文【精选】》的范文,感觉写的不错,希望对您有帮助,重新编辑了一下发到。一件事情的发生,离不开时间、地点、人物、事情的起因、经过和结果这六方面,即常说的六要素,只有交待清楚这几方面,才能使读者对所叙述的事,有个清楚、全面的了解。这里小编

2022年度有关安全学习心得合集(2022年)

本页是最新发布的《有关安全学习心得》的详细范文参考文章,感觉很有用处,看完如果觉得有帮助请记得(CTRL+D)收藏本页。有了一些收获以后,可以记录在心得体会中,这么做能够提升的书面表达能力。相信许多人会觉得心得体会很难写吧,下面是小编为大家收集的有关学习心得,供大家参考借鉴,希望可以帮

小学品德教师期末工作总结范本合集

最近发表了一篇名为《小学品德教师期末工作总结范文》的范文,感觉很有用处,重新整理了一下发到这里[http: www fwwang cn]。时光飞逝,如梭之日,回顾这段时间的工作,一定有许多的艰难困苦,是时候在工作总结中好好总结过去的成绩了。下面小编在这里为大家精心整理了几篇小学教师期